求助：小白求教IPS的各种鉴定方法

whether

烦请各位大虾详细说明

chunlanchen

GIBH干细胞实验室所用的方法是：
( r$ h2 |9 N$ p& ]2 _0 {3 `0 ]" v1、插入鉴定：观察iPS是否插入了四因子4 y* j2 y4 @0 c8 i: t
2、核型鉴定) x& {" m1 w" t9 a5 x
3、Realtime PCR 检测iPS外源基因沉默及多能性基因的表达水平3 Y9 L; G+ q6 R2 f5 t" g/ F( K" |8 X
4、免疫荧光鉴定胚胎干细胞标志物在蛋白水平的表达
+ r+ E. }8 L6 k# d! h0 E* R( x5、双硫测序方法鉴定多能性基因启动子甲基化水平
) V$ Q- A. U' o. H3 o- N! @6、皮下注射畸胎瘤
3 F: R  |5 \" }+ P, P$ a7、嵌合体注射鉴定分化潜能

whether

我自己总结了一下 大家看有什么问题) t8 u3 J0 t5 o: n5 }

0 g& J+ f" I/ _* v( eyamanaka 筛选因子时使用的方法：在Fbx15敲除鼠的基因组内，Fbx15基因被neo基因取代。在成鼠角形的成纤维细胞中，内源的Fbx15 启动子关闭，neo不能表达，细胞在G418药物处理下会死亡；在圆形的多能干细胞中，Fbx15 启动子会启动neo，细胞能在G418中生长。成纤维细胞在体外培养后感染携带干细胞维持因子的逆转录病毒，如果能够被重编程成多能干细胞（iPS），就能逃过G418的选择压力，增殖形成细胞克隆 7 T5 h  I6 t. G" Q5 G8 _0 M
& O$ A. J1 L5 ]# i0 Q3 l
其他鉴定方法
$ }, X" O9 D0 w3 y# a$ t1.Bisulfite Genomic Sequencing
$ ^+ o. T- g8 e& }7 R6 w7 N亚硫酸氢钠基因组测序，分析iPS细胞中的去甲基化，保持甲基化状态
, i0 U" C# @: A
: u! z4 b) j( j$ S$ c$ Y2.Determination of Karyotypes and SSLP by PCR ' m% k4 S- @4 a6 p
分析染色体组型与简单序列长度多态性（被称为第二代DNA）
7 t9 ^( J- ~& _
2 m- E3 e; ^/ V2 Z3.Western Blot Analyses + M. x) E1 v6 q3 D
通过Western Blot检测干性基因蛋白的表达4 D; U: z  Y0 \+ ^) c
' i9 }# n1 z) w- j
4.RT-PCR for Marker Genes
! b: X3 d* ^) U  v6 h检测干性基因表达- C9 p; m- ?% @2 g! S5 P: f6 X, l
  r! e( w4 h1 t+ _0 v* i: `
5.DNA Microarray
; K' v) G4 }  c! _6 |基因芯片。。。7 ?: Z6 y' }1 W8 y

& A  d1 `* |2 k. j. F6.In Vitro Differentiation of iPS Cells : H  H, v& w* u9 ]5 A) d+ ^- T/ w2 x
体外分化。。。ips-mef4-7细胞皮下注射进裸鼠后，肿瘤分化出多种组织4 r& b2 B. f  r9 H, O0 V7 T7 d8 Z

supercell

这是最早最经典的nature protocol，供参考。

frankieisme

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iPSC的鉴定：核型、基因表达、体外分化能力、体内多能性检测等多方面.