求助：小白求教IPS的各种鉴定方法

whether

烦请各位大虾详细说明

chunlanchen

GIBH干细胞实验室所用的方法是：
; S! L$ N8 Y+ B+ U* A' C" V1、插入鉴定：观察iPS是否插入了四因子
$ j# S+ Z3 d/ `/ R# H% w2 p  r2 w2、核型鉴定
% e: J8 m- A/ P' F% g7 P, ?4 G" M3、Realtime PCR 检测iPS外源基因沉默及多能性基因的表达水平
. H$ `& U3 y! J' y4、免疫荧光鉴定胚胎干细胞标志物在蛋白水平的表达
, g' s6 ], E- S: n2 F5、双硫测序方法鉴定多能性基因启动子甲基化水平
) J) A" `+ f4 e; t9 H' s& v6、皮下注射畸胎瘤6 ?6 Z$ N. [" t5 k; i3 n
7、嵌合体注射鉴定分化潜能

whether

我自己总结了一下 大家看有什么问题
) U3 b$ H5 p* A
3 t0 K, I& c5 c( b1 s/ c4 Yyamanaka 筛选因子时使用的方法：在Fbx15敲除鼠的基因组内，Fbx15基因被neo基因取代。在成鼠角形的成纤维细胞中，内源的Fbx15 启动子关闭，neo不能表达，细胞在G418药物处理下会死亡；在圆形的多能干细胞中，Fbx15 启动子会启动neo，细胞能在G418中生长。成纤维细胞在体外培养后感染携带干细胞维持因子的逆转录病毒，如果能够被重编程成多能干细胞（iPS），就能逃过G418的选择压力，增殖形成细胞克隆 7 b' b1 v& K9 m- j
3 ~9 n6 h4 z& `7 X9 T* ^* U
其他鉴定方法
. S0 L( T, Q% v( p: }1.Bisulfite Genomic Sequencing
/ ?; S  v  h" C$ K/ C3 J亚硫酸氢钠基因组测序，分析iPS细胞中的去甲基化，保持甲基化状态4 J" M' A5 ^  U* X1 p4 I2 ]) z

% V; y$ ?) t. O; k/ B2.Determination of Karyotypes and SSLP by PCR
6 W& x+ h3 w4 {6 f分析染色体组型与简单序列长度多态性（被称为第二代DNA）4 G" j3 Q1 y0 p: i% K5 e4 D

0 c7 H# Y. B) B1 |2 a2 t. ?! L3.Western Blot Analyses
$ q; u0 o% T  n" r  f通过Western Blot检测干性基因蛋白的表达, v8 B. W0 f: H0 {% W

. U- C2 _8 g1 b8 o4.RT-PCR for Marker Genes + y7 c2 S) G) t
检测干性基因表达/ b$ G* m. e% J
8 b) k' q% B9 J
5.DNA Microarray
& d8 k: H9 p; I# r7 L, z$ N/ V5 _基因芯片。。。/ {  y4 z) e  Z$ @: L- v" a

% h- `( G! X" z# D0 d! C! E% y6.In Vitro Differentiation of iPS Cells
4 r; ]4 r, C1 Z7 S! |体外分化。。。ips-mef4-7细胞皮下注射进裸鼠后，肿瘤分化出多种组织+ Y0 h5 ?, `! {0 Z. S  m

supercell

这是最早最经典的nature protocol，供参考。

frankieisme

回复 whether 的帖子
" N$ Q* Y* z( g( o. h
5 m/ a  U, w4 WiPSC的鉴定：核型、基因表达、体外分化能力、体内多能性检测等多方面.