求助：小白求教IPS的各种鉴定方法

whether

烦请各位大虾详细说明

chunlanchen

GIBH干细胞实验室所用的方法是：
4 V7 n- P& r5 [: z1、插入鉴定：观察iPS是否插入了四因子
4 l( Q; |* i* p4 M2 x% _2、核型鉴定# o. v( J7 S9 h( i' {% ~
3、Realtime PCR 检测iPS外源基因沉默及多能性基因的表达水平
0 C5 v# V8 a% S" z5 u1 p5 g8 ?4、免疫荧光鉴定胚胎干细胞标志物在蛋白水平的表达
' {4 H, d1 Y9 M* I, j) k4 w4 {! n5、双硫测序方法鉴定多能性基因启动子甲基化水平3 ?, N  `  p2 ^+ a1 B% J
6、皮下注射畸胎瘤
2 Z+ h' ~5 D* m/ `7 A7 H7、嵌合体注射鉴定分化潜能

whether

我自己总结了一下 大家看有什么问题
* [( |/ T1 g8 T! I& J# @) h- i- t; I# @: C8 ?8 Z
yamanaka 筛选因子时使用的方法：在Fbx15敲除鼠的基因组内，Fbx15基因被neo基因取代。在成鼠角形的成纤维细胞中，内源的Fbx15 启动子关闭，neo不能表达，细胞在G418药物处理下会死亡；在圆形的多能干细胞中，Fbx15 启动子会启动neo，细胞能在G418中生长。成纤维细胞在体外培养后感染携带干细胞维持因子的逆转录病毒，如果能够被重编程成多能干细胞（iPS），就能逃过G418的选择压力，增殖形成细胞克隆 & Z& U$ d  h5 F/ J  x% U
2 y+ r2 ^" x" ~7 u- n0 S, z
其他鉴定方法
$ N& j9 i. L* d4 [2 s4 H( H1.Bisulfite Genomic Sequencing
3 d( T$ d3 J5 j# e5 ^3 C: y3 P亚硫酸氢钠基因组测序，分析iPS细胞中的去甲基化，保持甲基化状态' R' s* o- G, c0 g# `( P' Q9 ~

' @7 s6 v7 X$ Y' D2.Determination of Karyotypes and SSLP by PCR   Z4 X, e% ~% F" D
分析染色体组型与简单序列长度多态性（被称为第二代DNA）
3 W: z; R: j6 S6 r2 ^3 U" l- U) F8 P 8 u) j+ Q6 h1 b: i  _( H% F0 I
3.Western Blot Analyses % y$ j: J* J' |3 g- A4 l- Z. p
通过Western Blot检测干性基因蛋白的表达
5 g! d6 g% t; ^, \- x  L, z   z0 u* |9 V+ a$ Z7 l- h
4.RT-PCR for Marker Genes
8 ^/ N3 W' {7 \: k" v检测干性基因表达, |( W: i. j- [! \0 [7 U
  `8 a4 m8 F8 m6 |
5.DNA Microarray ! }# ]8 j3 j9 s
基因芯片。。。3 E5 E8 j* q+ ~4 o

4 y3 s1 ?1 X6 q& ]6.In Vitro Differentiation of iPS Cells
' W* D: q% q; _# g体外分化。。。ips-mef4-7细胞皮下注射进裸鼠后，肿瘤分化出多种组织
; ^, r  c  U$ `5 E

supercell

这是最早最经典的nature protocol，供参考。

frankieisme

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) i" |# P  b7 i. m- b4 E: f
iPSC的鉴定：核型、基因表达、体外分化能力、体内多能性检测等多方面.