关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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' K$ D4 D4 h& _0 l$ j" }. `
: c) t% f6 C  l- X* w: ]你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？# o: @5 A; a4 G1 {+ U
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？# R, X9 h+ T, K
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？
/ W+ E/ V! U: d0 f越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子4 l: m- u. C: u: Q6 |& m

" S  X: B, U7 q& C: v  q1、这张照片是培养几天的？
0 x0 d4 B. o9 c! z( j! u+ _2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？
' P9 e, Q+ a7 \3 {6 Z3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
  q6 F1 ]) C3 w7 f6 W. s7 }4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）2 H: i* g0 |* b" S+ Y3 ~: A
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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) _' I0 K" }' \: j' N' T: g7 T5 u$ O: e' U+ B3 _: y. J
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；2 ~% ]6 _* O3 F
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
  O. l% u* p9 w# C/ x# s  q3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
- a2 M% b& Q) P# p% U- s( `4：长满50ml培养瓶花了18天。0 c) F" a' W6 Z: T
谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子$ Y5 U2 M1 f$ p9 `9 a5 Z3 z. f
! |9 B% _, R2 M
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
1 z" m1 S2 p; m' u2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
3 ?- o% w7 c/ R- O4 P! O3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天4 F( ^# K+ s3 g$ S9 k% z
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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& @2 f9 N& s+ B9 n% |/ y  f  m
* H( G3 l7 ]0 A# x' n谢谢~