关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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; B+ Z7 X; x$ j你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？4 R9 k1 j' E+ D3 d+ [  `
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？  R' V% i3 s* |! [! {
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？- D& ]2 ^( T' n% ?2 T% w' P
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子$ [& [1 D3 @9 i3 u

9 b; e! N6 M! g1、这张照片是培养几天的？# ]. t+ K  a2 J& T5 _# T
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？& v" J" I2 d/ J/ \0 b0 U0 H) P8 @
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
% A1 Z( T/ B+ o0 y6 z5 K; z0 ~4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
1 i9 v2 u  f. R; d7 F" Q. T* {了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子/ X. x( e5 U4 N$ X- b2 P% I
# i1 U# ^2 B3 f4 `; A0 g9 z& ^
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；) p/ t- p+ G1 c7 u: F- Z9 G
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~6 `8 w7 c" b1 T' R3 e+ Z( N. \
3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清9 d* `4 E! \5 \0 H. `
4：长满50ml培养瓶花了18天。8 `$ V6 N9 v& y8 z
谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子% s# b' H1 v6 F2 S
: i' ^/ s3 H& q
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
; y, Y/ z8 Q7 P- Z6 O2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
8 u; O4 i+ n) _9 L/ b3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天' J3 Y. o& u5 ~4 g* n
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子/ ]$ S* W' u6 W* f9 h: U) ?
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谢谢~