关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子# b  |! A1 ~1 Q5 J* l) G# ~

8 _9 O4 S, ?" X( u你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
# _0 d# D5 E% r" ^+ c  O. s  y临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？4 R  N# E: z# M$ J
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？' N& i# D4 B' e6 r
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子
  n* c8 ]& H8 A1 {6 Z
3 B6 ^' i- b( Z. O7 t1、这张照片是培养几天的？0 m8 [2 j% E; u, M4 s
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？
# N" g5 w5 W, c- I8 W/ p3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？# L, i2 w0 K4 L0 e: A- b1 Y; @2 u
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
( H# B* ]% t( a( q. W' E了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子6 P/ N5 z- T3 p
* S, ~3 u  q- H7 p
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
) s0 K4 V+ x5 l' V( T" y2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
6 F" g! \; w8 d1 d2 {6 X$ R7 q! ?3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
7 ]) s0 j7 v0 H4：长满50ml培养瓶花了18天。7 f; `. a3 I# e  W
谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子$ `5 w0 f! H: J. v
4 {! d" a0 I/ j3 L) `8 @  _) |
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；6 r$ R0 J4 y5 @3 O' V/ @+ o
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
4 a- z- ~- \- f- U4 w0 ]$ P  h3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
8 l* t8 d5 s/ ?1 M4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子+ o" Y8 [, ^$ D' T
& y* h$ ~& y" L" z' t
谢谢~