关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子+ n6 V: w, h3 U, R$ [2 i5 Z

- f: s: F. m. |" \2 O( K9 B' w你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？, B8 y$ L$ F( L, ]; u
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
' [' r, D6 E0 e+ |/ }9 [+ R培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？
2 N- c+ _  F% L. A7 C  Y- g越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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5 ~% W9 `% S0 E/ ^% {! r2 y9 r9 Z
) Y8 C% G+ |: v9 K9 ?9 e/ y# F8 R1、这张照片是培养几天的？
* O, j( D9 V1 n- e4 D. \2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？8 R; r8 k/ q. @2 }
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？7 A5 Q; \" n7 @! q9 {
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
7 ?  k: ?, @( q) E" w1 j2 x了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子) L8 O, r; K2 {  c  @/ Z" U, A. _8 ^
, {, T  g5 G5 Z* T
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
. M9 W7 }. f# N$ v2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~! [5 J# }9 H8 Z; t2 m+ C3 `9 k
3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清2 v7 {; R$ F" M: N
4：长满50ml培养瓶花了18天。+ Z4 Z/ M; i8 _  \1 q* W
谢谢~

liaoyanstudy

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+ X( }& j2 d5 C# c8 z* v
9 Y; U0 S0 S# |1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；# k/ ^# `6 _8 \
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清0 {9 N; p) F9 c' u
3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天+ |; z6 {% g0 ~
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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# f6 L; V! S! ?1 R. i
谢谢~