关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子! \0 W, W& w# I1 x& e+ |
* ]& M$ t' z. D% e0 p  h
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？7 {( m1 G) c" e% b) _
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
( X- Y+ Y. d3 \培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？4 G/ J2 W; V) F' J" ?. t1 R
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子( ~; d' L9 d* i2 W  a0 [
: A: S. s- [$ o0 Z# D; c
1、这张照片是培养几天的？+ N+ w/ U+ u  _7 |" Q
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？
! U& t- a+ F7 q5 C2 v3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？; c3 a5 q" |, I4 f% z/ R. B
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）, t0 Y! W# t3 J5 Y  [8 k
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子0 N5 a' f7 J" b$ I4 \" E: M' X

4 ~9 F2 r# b1 h% h1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；' y* \  H+ {; Q5 u
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
6 U8 H& W( |- b6 d) W8 _3 M( T: g3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
5 _4 T: v8 S/ I' s' e4：长满50ml培养瓶花了18天。4 i0 i4 p5 S" }; J% N4 Y" C
谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子( H$ X  e* c# U% F

+ R8 a% F. t* |  @' M2 `1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；2 b7 e/ S" @0 D+ X$ r  h; A' E( S
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
# a$ q! F/ a6 A2 ?3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
& C  l$ @- _5 x* r! a1 T3 f  [4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子; j- G, C- K7 B5 I
) d4 y5 Z$ `+ F
谢谢~