关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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9 O" v0 Q8 o% K/ Q1 }2 o9 r你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？1 z4 y& @. c4 I& o! P
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
4 `9 U0 v$ t/ t0 ^培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？- o: A8 Z% c  o5 L
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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' P9 C. W7 k& S8 c8 Q
) s  ?- |8 I5 M9 q1、这张照片是培养几天的？! v4 Z3 Z9 c  J  t6 y6 s* G2 o  `
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？
. W" s, e8 q/ y3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
! _* _% T% ]1 _1 ~4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）7 `$ }' b5 N3 w; W, v3 q3 q
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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4 c2 p' i0 I2 u; g
, j5 Y+ W& j- z1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
) P! l+ p( J3 s1 w! W2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
* P( `" K' H9 U% R! F6 Z) x* l3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
' v: K5 L9 z! F7 a4 J( }2 T# s; N3 D4：长满50ml培养瓶花了18天。
: n/ Y( x, h: f9 I8 g谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子+ {9 ]' J- E; [; E7 r

$ v# U( P4 C6 B: u! }. `, z* g1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
0 q  C9 W9 _# s/ V* P- p; P  X/ _2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清# K) W9 P& y9 [) h3 s+ Y; |
3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天" l/ J8 G2 A7 [9 u7 U
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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( n4 P1 F+ f5 a" W  P0 @
* Z  A  O% S' _$ c* {谢谢~