关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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% q# v4 t! t: b
. j  k. @! \) e4 ]6 ?你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
7 b2 r. Y5 p1 i% ]# k临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
) D4 [  n6 Y0 Y5 F0 g培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？
# [) ]% b1 Q6 k% C5 R  r9 d! D7 s越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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2 a& Y, k' ?; Q9 O2 a  G2 i% e, M- L) n
1、这张照片是培养几天的？
7 ~- r6 U1 @5 {. F, @/ z. S2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？
* L! s' p: @/ S  A3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？# E7 b8 f/ t# A
4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
* @1 y' G4 @6 J, z了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子  c; B2 H0 Q3 Z( i1 L2 x6 b

+ N& B; K6 j- j9 _- g8 P1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；( f8 ~/ N# _2 ?" J3 d
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
0 E! i8 n& m8 P3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
0 a$ l+ {5 l) f* U* U4：长满50ml培养瓶花了18天。
( [' i& x+ I' M/ i谢谢~

liaoyanstudy

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7 T4 N) Z, W4 h- m3 [8 i& l, f6 z/ p# L" i2 I
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；/ ~6 w: N" \' o+ M  V, [3 s
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清+ ?6 t/ z& ]* ~, e; c+ T5 F
3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天. K+ ^% b2 g" f5 Q. f" J
4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子' Z, j1 z0 u, e9 r6 h
2 B' |% Z4 u1 l9 f- M+ P1 ~
谢谢~