关于包装慢病毒过程中的几个问题

我爱火热的冬天

我现在在包慢病毒，一直处于摸索阶段，有以下几个问题忘各位朋友帮忙解答
# F0 _- k& @: P1、用于包装的质粒抽提用哪个公司的比较好，平常的用于无内毒素的大提试剂盒可以吗？
9 Y7 x: N& _( g& D$ V6 V4 q2、看到很多帖子对于慢病毒的滴度很是在意，滴度一般在多少范围内可以接受呢？. M( Q' e# t2 k# a# T2 e/ J
3、我也是用的KOSM四个因子诱导ips的，想问是四个分开诱导好呢，还是连接到一个载体上诱导好呢？
7 K' I* ~' s- n7 j1 V# W: P4、在包病毒的过程中是不加双抗的，好像是说对病毒的包装有影响，可是双抗不是只对细菌有作用吗？具体是什么影响呢？& q( |% q4 e7 f, v
谢谢~

tjbiohf

1我们lab用的是invitrogen的中提试剂盒
( [6 D" O  X1 Z+ Y9 f; q2如果要做显微注射的话对病毒滴度的要求比较高要10的8次方以上，一般感染细胞的话用不了这么高的。% j, N+ c* |  L
4这个我也不清楚的，我们老板要求我们平时养细胞也不加双抗，只在做原代时加双抗。

我爱火热的冬天

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, ], A$ K8 D( W, F- u
! S0 A1 X1 {: B4 p! @谢谢

184lj

质粒的提取要注意看一下 质粒长度，如果过长，不要用吸附法的试剂盒，要用沉淀法的试剂盒。还有去内毒素是必须的。

我爱火热的冬天

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& H. h8 [# _7 x1 R* s
我的片段是属于过长的那种，如果不用吸附柱的话，还有哪些沉淀法的试剂盒效果不较好，希望推荐一下你们用的。:)

184lj

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) I0 N! v! W1 Y$ a' w* a
威格拉斯（北京）

SSRSQ

1：以前一直用天根的，但是天根的大提试剂盒有时候会提不出来，现在用欣研的盒子，不过是你那可能没有这个公司代理。平时用的无内毒素的盒子就可以的，注意浓度别太低，500ng/ul以上吧。! d0 O, A1 z$ T* A7 l+ }5 E9 i
2：我们实验室不测滴度，形成了自己的习惯，我们是一个10cm板收的病毒可以感染一个六孔板。4 {+ W8 ]; e5 m8 Q; L
3：不建议放在一个载体上。理论上放在一个载体上是可以的，但是那样你的病毒质粒会很大，看你的包装系统最多可以加多长的外源基因了，如果你用2A连接OSKM的话后面的因子表达会有影响。所以最好分开各自有各自质粒，分开包病毒。/ E) l, R* f! h! Q$ K! U
4：双抗这个对细胞状态肯定是有影响的，我们实验室一般都不用双抗。我个人感觉抗生素在溶液中怎么的也会对细胞有影响，至于机制不清楚了。

我爱火热的冬天

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5 S' p- B4 w# B4 T
感谢回复，回答的很详细，很受用，谢谢

sue

1. Qiagend的Midi-Prep Kit, 直接用；
. S* [( ^1 e/ ~, O3. 不同的质粒，分开包装；
6 O" a* U0 Z6 O& e+ k4. 跟所用的试剂有关。我们用的XtremeGene，包装时加双抗，而且不换液，48-72小时直接收病毒