CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！

lyj-0017

      传统培养方法都是D0添加IFN-r，D1添加IL-2和anti-CD3 mAb，这个工艺大家一般都是首先在培养瓶中培养，几天后转培养袋或继续使用培养瓶培养。
$ Z) L# ^4 `$ ?' ^4 M& l    问题1：传统工艺为何必须要首先添加IFN-r，24小时之后添加后两种细胞因子？可不可以在D0天同时添加IFN-r、IL-2和anti-CD3 mAb呢？
2 w2 n& t9 j4 C- q/ G1 s    问题2：是否可以分离出MNC后直接转入培养袋添加细胞因子进行培养呢？+ u) s& C  Q: _, W2 J$ i' E% ], z

2 L2 ^' _3 z6 U3 ?7 z    期待高手不吝赐教啊~
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jxydiandian

之前看过一篇文献，说第一天加IFN-r是为了增加细胞表面的受体对IL-2的结合率，并且增加细胞的细胞毒性，大概是这样，因为是好久好久之前看的文献了，不太记得了，回答有失严谨，请见谅。

jxydiandian

对于第2个问题，是否在培养袋直接培养要看细胞数量的，如果细胞数量太少，在培养袋培养，细胞密度太低，不易于增殖

jxydiandian

补充：在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ可降低IL-2 用量,同时IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关, 先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性, 这是因为先加入IFN-γ, 可促使PBMC上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞

lyj-0017

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$ a% c9 s( d* {. d% ^
* t$ G& v2 ?; w. s6 Q如果细胞数量够多呢？比如使用血液分离机分离单个核细胞，这样分离得到的单个核细胞相对较多，这种情况下是否可以三种因子一开始时就同时添加呢？

jxydiandian

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8 y( q& c, I& m1 Q, P+ t  H( G2 M7 M  v+ H+ r7 C2 j8 [( X
我觉得你应该把我的回答在看一遍

chslyx

回复 lyj-0017 的帖子- @8 S! E, C8 E
6 b! t; Q, q* O- l" K4 y0 |
第零天加IFN-R是为了增加细胞毒性，前二十四小时主要是诱导细胞的毒性，加了IL-2的话会影响诱导的效果，，而问题二主要是因为细胞密度问题，因为刚分离出来的MNC会比较少，用培养瓶会增值比较快，因为细胞聚集的话更容易增殖

lyj-0017

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- e* ~1 W) h- y+ U' ?9 ~
' o2 f2 z- R" }1 {不好意思哈，一开始没有深刻领悟你的话，现在明白了。那你认为转袋的细胞密度应为多少比较合适呢？

jxydiandian

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2 [; W. [/ ^6 r5 v2 w
! Q2 e7 I* F1 \0 y( f$ i转袋的密度跟瓶扩的密度是一样的，差不多还是按0.5-1*106/ml密度吧

lyj-0017

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. K, V1 M- N% H! d) p# @) t: Q' m, v' e. u1 T
嗯，最近就按照这个密度试试，非常感谢啦~