CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！

lyj-0017

      传统培养方法都是D0添加IFN-r，D1添加IL-2和anti-CD3 mAb，这个工艺大家一般都是首先在培养瓶中培养，几天后转培养袋或继续使用培养瓶培养。
& g/ W/ `9 z$ g+ B$ n    问题1：传统工艺为何必须要首先添加IFN-r，24小时之后添加后两种细胞因子？可不可以在D0天同时添加IFN-r、IL-2和anti-CD3 mAb呢？
" f; J% m* v0 }$ n. Z$ O    问题2：是否可以分离出MNC后直接转入培养袋添加细胞因子进行培养呢？; \  e1 }. S# l# o8 H% v: s8 R
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    期待高手不吝赐教啊~
% E+ U; w$ c1 T/ t! m9 x" Q# K$ V8 U

jianmin1979

很受用

lyj-0017

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) C' a! _/ }, t& \( c8 _0 e& s5 u. T) L; u4 h+ d; M% p$ w
嗯，最近就按照这个密度试试，非常感谢啦~

jxydiandian

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2 Q) B; I2 ^8 k
2 _5 B' P9 C& l- s1 L7 t转袋的密度跟瓶扩的密度是一样的，差不多还是按0.5-1*106/ml密度吧

lyj-0017

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2 h" V! @# g% N$ l1 G& w
4 c; V2 y$ s  U$ n不好意思哈，一开始没有深刻领悟你的话，现在明白了。那你认为转袋的细胞密度应为多少比较合适呢？

chslyx

回复 lyj-0017 的帖子4 I. N! n2 R8 H& j5 [/ I0 w

1 ^' I6 J! ~- E2 G第零天加IFN-R是为了增加细胞毒性，前二十四小时主要是诱导细胞的毒性，加了IL-2的话会影响诱导的效果，，而问题二主要是因为细胞密度问题，因为刚分离出来的MNC会比较少，用培养瓶会增值比较快，因为细胞聚集的话更容易增殖

jxydiandian

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/ B" j" j7 j1 a' F$ S- y; x: I% F5 n: H
我觉得你应该把我的回答在看一遍

lyj-0017

回复 jxydiandian 的帖子7 x. h  h, d0 Q- X
7 }: L6 R  Q  R
如果细胞数量够多呢？比如使用血液分离机分离单个核细胞，这样分离得到的单个核细胞相对较多，这种情况下是否可以三种因子一开始时就同时添加呢？

jxydiandian

补充：在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ可降低IL-2 用量,同时IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关, 先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性, 这是因为先加入IFN-γ, 可促使PBMC上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞

jxydiandian

对于第2个问题，是否在培养袋直接培养要看细胞数量的，如果细胞数量太少，在培养袋培养，细胞密度太低，不易于增殖