CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！

lyj-0017

      传统培养方法都是D0添加IFN-r，D1添加IL-2和anti-CD3 mAb，这个工艺大家一般都是首先在培养瓶中培养，几天后转培养袋或继续使用培养瓶培养。: s% a, d3 e! v4 ~
    问题1：传统工艺为何必须要首先添加IFN-r，24小时之后添加后两种细胞因子？可不可以在D0天同时添加IFN-r、IL-2和anti-CD3 mAb呢？
! t; x/ o6 X" t# b- n1 s- B    问题2：是否可以分离出MNC后直接转入培养袋添加细胞因子进行培养呢？
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    期待高手不吝赐教啊~
8 d, |  Y. q/ d1 r" q. s

jxydiandian

之前看过一篇文献，说第一天加IFN-r是为了增加细胞表面的受体对IL-2的结合率，并且增加细胞的细胞毒性，大概是这样，因为是好久好久之前看的文献了，不太记得了，回答有失严谨，请见谅。

jxydiandian

对于第2个问题，是否在培养袋直接培养要看细胞数量的，如果细胞数量太少，在培养袋培养，细胞密度太低，不易于增殖

jxydiandian

补充：在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ可降低IL-2 用量,同时IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关, 先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性, 这是因为先加入IFN-γ, 可促使PBMC上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞

lyj-0017

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4 q3 {3 }9 J, o/ [0 X8 I2 W" A. K' w0 G$ R
如果细胞数量够多呢？比如使用血液分离机分离单个核细胞，这样分离得到的单个核细胞相对较多，这种情况下是否可以三种因子一开始时就同时添加呢？

jxydiandian

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( F/ R" b- q- L$ P* A6 v3 h
5 O6 a" x: V, P8 O我觉得你应该把我的回答在看一遍

chslyx

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) s# z$ m4 {" S) \2 G6 P; k
9 G5 [9 E5 o/ o9 d$ }第零天加IFN-R是为了增加细胞毒性，前二十四小时主要是诱导细胞的毒性，加了IL-2的话会影响诱导的效果，，而问题二主要是因为细胞密度问题，因为刚分离出来的MNC会比较少，用培养瓶会增值比较快，因为细胞聚集的话更容易增殖

lyj-0017

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% u  g& L0 D& S) d8 @2 |$ ^0 _  I' Y# H  M3 b  ?
不好意思哈，一开始没有深刻领悟你的话，现在明白了。那你认为转袋的细胞密度应为多少比较合适呢？

jxydiandian

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5 Z+ `* q( s3 k3 q) V6 j/ y0 u7 f4 M, y( C2 e' W
转袋的密度跟瓶扩的密度是一样的，差不多还是按0.5-1*106/ml密度吧

lyj-0017

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5 d0 f$ o/ P3 X1 ?/ y. R' Q. T7 j. k
嗯，最近就按照这个密度试试，非常感谢啦~