精原干细胞建系后marker验证

20111109

; [, B3 W7 u, Z
" ]* G4 f; D! ~  T
% H5 \. L& A- @  C& I+ S4 `如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等
6 ^1 f& k6 q* S2 N3 Q/ f. z我想问的是
& [; k5 Q/ k- x& Q3 k1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）$ M/ z3 `6 J8 t$ O
2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）9 I+ s$ Y  f7 B
3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。
1 g% F* r  c# L: `* E! ]1 n  P4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。+ w- t. A( e, `- U9 I* E9 ^0 }
刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~
3 w1 F& p7 b- c
% F+ R3 H: u. |, i, H0 \2 a3 z+ G- ?

jialiyang

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/ X1 o/ j5 }' `% J0 |; K+ G
9 M, T; P# o4 Q% w  G, E$ I1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白
9 ]3 l9 W0 y$ D+ U% N- Y4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

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1 X' H! r2 H; z( {9 J; {4 t7 b% y2 t4 \
你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

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! v9 |4 U4 m/ x$ C4 {1 x+ h9 z
) D/ }3 {5 u3 E$ j  N抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

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0 k# {( X' E2 K
0 j9 ?2 C7 E; l* b  h' ?$ n% q6 D9 `嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

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20111109

回复 moluxingke 的帖子% @. [6 M$ l& _" m
- l4 U/ _* ]7 n7 c$ s* d  E, V
抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。
% M# n  t; V1 [+ d8 F  H3 g0 ?5 x2 X其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。
+ B; A) @- y6 i# c" g: N1 Q再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

回复 zhangyan813 的帖子4 F4 c: x' B8 F0 H

% c" n9 o4 K) w9 ?5 a: S, W感谢您的答复~~
( e. p1 d/ K# ]4 }我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。
$ m# d5 k! H9 h2 H. j+ U您的建议很对，核定位要做个triton打孔。
( R0 ?$ g( F) h( i但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。