精原干细胞建系后marker验证

20111109

# m8 L0 p2 R: ]$ i% T* h3 W
% T+ K: G$ r; J7 K, o
% e5 Q0 {  X  T0 N2 \" h" D% ~
如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等- y3 I! O! A3 h8 K1 Z8 s% H) `
我想问的是+ y$ i/ O# ^/ c* u2 y- E
1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）: J$ L: B1 \$ H+ I/ H' Y% y
2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）0 Z5 O3 n  \4 j  @0 M& T" B, \
3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。7 G7 J* h2 ?, u  Y
4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。
3 T$ `& m: f& m9 F刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~: P/ q: m0 s! N8 ^
& Q+ a% g: k# |( g; `7 ~

9 \! s4 {0 W# W; ^; }$ Y# E

jialiyang

回复 20111109 的帖子8 M: e9 ~% Q6 g7 l* A

* Z6 g9 g" l" H; F& @% f) ^1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白
+ R* l) S- p* {% Q9 o! o4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

回复 20111109 的帖子
$ u; Z4 x+ _/ I5 _# L) D8 W# }/ R' T* e+ w
你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

回复 jialiyang 的帖子$ [0 W) N6 ^! {/ k5 F" q% M
% b' D8 L/ N# f" m* @6 V8 m% E
抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

回复 bj123 的帖子
$ D  y5 N- R- ~1 r( f
$ I% l1 m+ E; ]( c% O9 W嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

( u! E! H6 p- S* Y! J- Y+ B

20111109

回复 moluxingke 的帖子6 l( ~2 e" c  u: Z8 `8 U8 \

6 |6 ~9 y9 K' P# H抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。
( e7 [0 Q" V* a' V) X9 R5 B! z其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。2 Y# K- U8 X# q4 E5 U
再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

回复 zhangyan813 的帖子- I+ |- M0 R* Z0 C2 A5 w

: |' X8 s0 R$ U2 j) ^9 z1 y感谢您的答复~~
& N  r  D; L" B; P, F( n我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。
6 A) C) S5 m! k% I7 z您的建议很对，核定位要做个triton打孔。$ o/ F3 |) ~  T3 c! j
但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。