请教hESC的冷冻与解冻protocal,急急急急急急

qiushuiwuhen

如题，请教各位战友关于HESC的冷冻protocal,之前的冷冻用的是10%DMSO+40%SR+50%培养基，问题是：解冻后的克隆几乎全部死掉，不管是在feederfree还是feeder-dependent的情况下，长势均不良好，请教各位冷冻解冻的经验，如能分享protocal更不胜感激。

waterbubble

cs10是stem cell 的。可以用于HESC 和IPS的冻存

waterbubble

CS10 is an animal protein-free, serum-free and defined cryopreservation medium containing 10% dimethyl sulfoxide (DMSO).

qiushuiwuhen

回复 waterbubble 的帖子, A* H6 ^6 p. h& C+ P$ i8 e
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ＣＳ１０是何东东，没有听说过呀，是成品的冷冻液吗，并且终浓度１０ｕｍ是指的谁？谢谢

qiushuiwuhen

回复 孙帅帅 的帖子0 Q- u3 V- ]* f' ~0 w* g6 Q9 u

5 ~! u0 F1 |. S- y; w$ H* F之前看一片nature protocal，说的是冷冻IPS用的就是10%ＤＭＳＯ＋９０％　ＦＢＳ，ＦＢＳ可以换成ＳＲ，但是比较证明克隆复苏率的情况，ＦＢＳ优于ＳＲ，准备下次试试，谢谢

waterbubble

我们用的冻存液是CS10+Y27632，终浓度为10um。

孙帅帅

http://www.stemcell8.cn/thread-69628-1-1.html4 n( N; |! U/ V" C1 i, L  h3 s
我们是用的10%DMSO+90%FBS  复苏效果还不错，主要是冻存的时候吹打细胞的时候不要吹打的太碎！

希望之光

回复 qiushuiwuhen 的帖子0 A2 S  }0 T& I* w6 [# ?. }
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不需要加bFGF，用DF12和20%KSR重悬

希望之光

回复 qiushuiwuhen 的帖子
% `" o5 W9 L9 B6 F, `9 Y: J; s: o9 k  n* p- t2 c
成活率挺高的呀，主要是操作细节要注意。

qiushuiwuhen

回复 星光灿烂 的帖子( f9 q; F( W- F

9 z% h6 O* ?& \$ F9 @9 l) m十分感谢