这是克隆吗

pjlsyz

2 o) c/ i7 o  Z: H4 b9 ?8 g

- o' |8 I. T6 j  q这是诱导12d时的图片，是细胞太多了结成的团块还是重编程完后又有点分化的细胞？主要是整板都是这种状态的细胞。

franklinhg

很多背景信息都没有告知，不好说。。。。如果是GFP的，那里看看荧光不就行了嘛？ 如果不是 GFP的  那挑去出来passage，或者是做QRT-PCR或者是用life的一个活体蓝色的ALP试剂盒染色后看看吧。。。

pjlsyz

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9 w( l! S  `  D7 b9 ]8 Q9 V$ m; Q6 J" J' _
有荧光，因为我用的是tet系统的因子。主要是想问问这样的形态对不对。

漫步云端0511

细胞长老了  还是做QRT-PCR检测一下，看看基因表达情况

bubble_w

这个不是克隆，我之前做人的iPS诱导的过程中也遇到过完全一样的情况。试着挑取下来，根本不会增殖，后来发现是成纤维细胞成团出现的结果。

pjlsyz

回复 bubble_w 的帖子# w  V7 l( w" v$ d

$ @6 d$ [/ T- m9 c" x% ]出现这种情况是初始细胞过多的原因吗？

bubble_w

回复 pjlsyz 的帖子$ y6 o' }! [& y

% ?  [3 F' ?* Z; N, ?* c不是，还是重编程因子不给力。换句话说，就是重编程基本没启动，或者启动后各因子表达不平衡，比如Oct4表达低。我们之前出现这个问题是病毒包装的问题

pjlsyz

回复 bubble_w 的帖子$ c; t. _5 g* x: a# a- B! U0 ^
5 H% s3 i& i8 O6 P
我准备重新再做一遍，那主要注意些什么呢？

bubble_w

回复 pjlsyz 的帖子: i- m- C$ \9 i% B/ W9 M( u. f8 w

5 u$ J0 N( v, r$ U建议你先做一个GFP的阳性质粒，先转入GFP，看看表达阳性率，还有表达的时间，这样比盲目做实验，出不出克隆靠运气的强。

pjlsyz

回复 bubble_w 的帖子4 X/ Z3 |" ]7 Z( y
1 M, [( m5 {/ x3 }
我质粒是要的，做之前先感染293看了下大致的效率