这是克隆吗

pjlsyz

& ^2 P) P  s; t/ \. b

4 ~; s/ B, N1 T' L3 [. z! p) A/ ~$ }. x这是诱导12d时的图片，是细胞太多了结成的团块还是重编程完后又有点分化的细胞？主要是整板都是这种状态的细胞。

franklinhg

很多背景信息都没有告知，不好说。。。。如果是GFP的，那里看看荧光不就行了嘛？ 如果不是 GFP的  那挑去出来passage，或者是做QRT-PCR或者是用life的一个活体蓝色的ALP试剂盒染色后看看吧。。。

pjlsyz

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. M% u* w9 }: o% u7 E/ j& |
$ ?: [3 t( L5 T3 t! y有荧光，因为我用的是tet系统的因子。主要是想问问这样的形态对不对。

漫步云端0511

细胞长老了  还是做QRT-PCR检测一下，看看基因表达情况

bubble_w

这个不是克隆，我之前做人的iPS诱导的过程中也遇到过完全一样的情况。试着挑取下来，根本不会增殖，后来发现是成纤维细胞成团出现的结果。

pjlsyz

回复 bubble_w 的帖子! e! ^9 N7 z& e; ^, a7 y6 `

. c) S% ~- E" y' B% r2 Q- g" O出现这种情况是初始细胞过多的原因吗？

bubble_w

回复 pjlsyz 的帖子; o1 K9 j' T! J+ D

6 ~7 _. v' X  R. J9 d0 s. c不是，还是重编程因子不给力。换句话说，就是重编程基本没启动，或者启动后各因子表达不平衡，比如Oct4表达低。我们之前出现这个问题是病毒包装的问题

pjlsyz

回复 bubble_w 的帖子4 O% Z' |# l6 X# ]% `, Y1 M, i
( U5 t& K8 Y: ~) V/ f$ K8 C
我准备重新再做一遍，那主要注意些什么呢？

bubble_w

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. h: ?2 i1 I, p/ i1 `, ]/ H. @  U* |
建议你先做一个GFP的阳性质粒，先转入GFP，看看表达阳性率，还有表达的时间，这样比盲目做实验，出不出克隆靠运气的强。

pjlsyz

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( x% A, X! e/ _
4 Q* s6 R$ J6 \3 \( R# Y8 a5 K% K我质粒是要的，做之前先感染293看了下大致的效率