免疫组化DAB显色太快，10秒不到就片子就黄了

请叫我晓白

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各位请指教一下啊
' ]3 Z4 Z) a6 p4 J: G) b/ l6 `, Z急啊 做了好几次都做不出来+ m. d- o' A: v
我做的心脏组织的免疫组化，用的是博士德公司的SABC试剂盒
' ?0 e- e4 Q! e大概步骤如下：+ P- t( m% J' I( q- _
脱蜡至水，微波修复中高火5min沸腾后断电保温5min，冷却后3%双氧水避光20min% |. v1 d' y% _% _( E- a9 }2 c
一抗1:50 1:100 1:200四度过夜，加biotin羊抗兔二抗37度20min，后加SABC37度20min4 F6 B' \5 z  w" Z5 k2 d& @* [8 B8 Q
DAB配制：滴加A液（DAB）、B液（H2O2）、C液（TBS），然后加1ml蒸馏水
" ]3 W. Q/ ^( P+ V* `! O) U  B滴加DAB显色，自来水冲洗15min，然后苏木素复燃1min，自来水冲洗15min反蓝，盐酸酒精分化10秒9 e$ X) R) ]9 v$ L( c2 I, v
脱水透明。, L: i6 |4 E! r1 h- g: O  \
结果很不理想啊
1 \/ Y3 a  @5 m- h/ H我滴加DAB显色10秒片子就泛黄了，根本来不及镜下观察，赶紧涮干净拿去自来水冲了。可是镜下一看片子都很黄# Z7 {9 |: f5 s# l& E
而阳性的感觉不明显。
- `+ Q8 ^: G4 D7 b  B% a请问这是什么原因啊？是我的DAB配制有问题吗？A、B、C液和蒸馏水应该按什么顺序加啊？
" b! \: W6 j8 D( L) P! D7 _$ _  K另外DAB显色快是否可以降低一下DAB浓度呢？8 F" P( m1 Y7 a6 M6 ]) S% k
万分感谢  ( t7 S; w/ S6 W* c; y9 A' T

runsong

一抗太高了

请叫我晓白

flagarmy 发表于 2013-11-24 10:32 0 l/ x7 `* K8 P) |9 v
a+b+c  避光没？

5 h1 c$ B6 i8 Y( U我都是要用之前配制，配好就用。应该不存在没避光的原因吧
8 {  ?  d; Y+ q0 u$ O

flagarmy

a+b+c  避光没？ * {5 Z. @9 S+ N8 c. Y$ E

flagarmy

a+b+c  避光没？
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