免疫组化DAB显色太快，10秒不到就片子就黄了

请叫我晓白

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$ ?/ I9 S1 _% ?* t+ w. d各位请指教一下啊( J0 {$ T3 ?+ j( X2 j6 K( j
急啊 做了好几次都做不出来
0 A% E, V& @, f, Q  i" O0 A我做的心脏组织的免疫组化，用的是博士德公司的SABC试剂盒
4 a& Z, [) M3 A5 K; K! w( m- F大概步骤如下：& e  ?+ @% W; c: d! T" c; j
脱蜡至水，微波修复中高火5min沸腾后断电保温5min，冷却后3%双氧水避光20min
2 l+ C1 J  P: T! t  G# V一抗1:50 1:100 1:200四度过夜，加biotin羊抗兔二抗37度20min，后加SABC37度20min
+ V$ b4 E2 ~7 {& SDAB配制：滴加A液（DAB）、B液（H2O2）、C液（TBS），然后加1ml蒸馏水
! H/ O* N5 O3 w2 ~滴加DAB显色，自来水冲洗15min，然后苏木素复燃1min，自来水冲洗15min反蓝，盐酸酒精分化10秒
) Q% i  ]6 s! S" Y8 ]& K脱水透明。  q8 a- E& U; R! G) G
结果很不理想啊* m5 f& S* z; P8 e: J4 H- E
我滴加DAB显色10秒片子就泛黄了，根本来不及镜下观察，赶紧涮干净拿去自来水冲了。可是镜下一看片子都很黄6 U% ~# a  n; ?2 o* B8 M! ]
而阳性的感觉不明显。) A3 e# d, A  e0 `& u
请问这是什么原因啊？是我的DAB配制有问题吗？A、B、C液和蒸馏水应该按什么顺序加啊？
% A8 D! |  t; x另外DAB显色快是否可以降低一下DAB浓度呢？! ]. {1 V2 D5 h; H* O* `4 `- J  d
万分感谢  
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flagarmy

a+b+c  避光没？ 9 {& W; W$ F9 s8 _6 i' z

flagarmy

a+b+c  避光没？   D6 V& N. a' q2 g. B8 ~' N

请叫我晓白

flagarmy 发表于 2013-11-24 10:32 + X$ J  @# b: d! E
a+b+c  避光没？

& }0 I7 w- z3 b' y我都是要用之前配制，配好就用。应该不存在没避光的原因吧1 @3 Z8 w4 K/ l4 o

runsong

一抗太高了