免疫组化DAB显色太快，10秒不到就片子就黄了

请叫我晓白

& Y$ B% a3 x4 j; M

+ f( h8 i& y% z, H% o各位请指教一下啊2 ~9 Y) J" i- |& r; w1 _
急啊 做了好几次都做不出来
: U) S: V! r: W& i我做的心脏组织的免疫组化，用的是博士德公司的SABC试剂盒
8 h1 R4 w* o! k3 l# R" Z( d5 ?大概步骤如下：0 C& ^# r4 B! z
脱蜡至水，微波修复中高火5min沸腾后断电保温5min，冷却后3%双氧水避光20min% ~: F; O' s/ {0 n3 T
一抗1:50 1:100 1:200四度过夜，加biotin羊抗兔二抗37度20min，后加SABC37度20min
( U& h& n7 w. }( u: vDAB配制：滴加A液（DAB）、B液（H2O2）、C液（TBS），然后加1ml蒸馏水' M! [- y. E+ e: N  E
滴加DAB显色，自来水冲洗15min，然后苏木素复燃1min，自来水冲洗15min反蓝，盐酸酒精分化10秒
# [$ S1 T; O2 u, C  V脱水透明。
8 i) U* W$ v$ B8 Z- @2 a" r. ~+ k) ~结果很不理想啊
+ C; J3 \8 _: ^; Y! n4 S# ?3 h我滴加DAB显色10秒片子就泛黄了，根本来不及镜下观察，赶紧涮干净拿去自来水冲了。可是镜下一看片子都很黄; r" p( f( e5 d7 P, h7 o# C
而阳性的感觉不明显。
4 N+ z  P  R# i请问这是什么原因啊？是我的DAB配制有问题吗？A、B、C液和蒸馏水应该按什么顺序加啊？
3 y9 F6 a. I" ]' m8 `$ U/ o' a3 C0 K- o另外DAB显色快是否可以降低一下DAB浓度呢？. u+ ]+ z& ~: }" r
万分感谢  
$ j7 @0 L; g" `8 M

请叫我晓白

flagarmy 发表于 2013-11-24 10:32
  X  G' o! Z3 j3 C  V; l  i$ L1 |: Qa+b+c  避光没？

) L4 E1 X: M' _& f/ c9 M, h# |我都是要用之前配制，配好就用。应该不存在没避光的原因吧
$ d* F! c7 P) h) Q