免疫组化DAB显色太快，10秒不到就片子就黄了

请叫我晓白

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: O. k8 J) o% S; B' I$ @各位请指教一下啊" }! e7 p7 m/ r! O/ ^7 i
急啊 做了好几次都做不出来0 d+ e' g  s! D( d1 _( @9 n
我做的心脏组织的免疫组化，用的是博士德公司的SABC试剂盒
! u; o- n5 |' s# k8 j3 U大概步骤如下：
' S5 K; E% i4 a; q- Z脱蜡至水，微波修复中高火5min沸腾后断电保温5min，冷却后3%双氧水避光20min
4 D2 g/ O  D; W" ^/ c9 A! e) W& \5 V1 s8 S一抗1:50 1:100 1:200四度过夜，加biotin羊抗兔二抗37度20min，后加SABC37度20min
8 |- W4 Y, E8 m; {* X3 J5 [DAB配制：滴加A液（DAB）、B液（H2O2）、C液（TBS），然后加1ml蒸馏水
: d* M# B( g# \$ Y滴加DAB显色，自来水冲洗15min，然后苏木素复燃1min，自来水冲洗15min反蓝，盐酸酒精分化10秒
# L+ y, E" v$ o脱水透明。6 M( U2 v  {: x  x
结果很不理想啊
$ H6 }7 I& A0 F1 a5 i# {. p& g我滴加DAB显色10秒片子就泛黄了，根本来不及镜下观察，赶紧涮干净拿去自来水冲了。可是镜下一看片子都很黄0 R' ?4 Q# r! j* j) X4 a5 o  s
而阳性的感觉不明显。. A$ B1 b: [% a* P2 L' C6 M
请问这是什么原因啊？是我的DAB配制有问题吗？A、B、C液和蒸馏水应该按什么顺序加啊？4 N% k) @8 m  m2 U! Z1 ?9 d. P
另外DAB显色快是否可以降低一下DAB浓度呢？6 R. G9 r' s7 _7 Q% t
万分感谢  % x  w1 k9 @) `$ ^: C& W* X1 o

runsong

一抗太高了

请叫我晓白

flagarmy 发表于 2013-11-24 10:32
6 c  Z3 }) K- u( E; N2 Sa+b+c  避光没？

( G2 U3 ], ^/ O5 o4 u
我都是要用之前配制，配好就用。应该不存在没避光的原因吧
+ R: j, W( A, t9 f

flagarmy

a+b+c  避光没？ ; v8 \7 a  b# V4 Z% K5 e0 a

flagarmy

a+b+c  避光没？
; k) q. t+ l' P