CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
5 A: A  t; {7 q- w, R0 a4 }第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？( X6 y0 q" O. c  T: X, K5 Q$ g
第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。3 I7 H3 h' }+ R) {3 A. a
多谢拉！" ?! {2 E. y0 w( r4 s

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
' a/ H: G1 J  R8 i6 f% x
% Q3 K4 q! y0 i& `& Y4 B4 y现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子
$ X0 G  L3 H$ L4 a( k9 h( p7 C* G6 u, z% U& L% A. p* R: u
再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子# w/ L+ v0 W5 `2 x' n& R2 ?
- `9 K& o5 t* q! y9 R+ l
是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
3 ^* q6 l" Y' Z$ b% S8 w0 A4 A# }$ m& F/ q6 U
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。+ y! l4 ]& t$ V4 A: o! W
2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？* I% |* |# J7 f* U, Q9 r
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂6 g4 G5 {) Z- Y' Q
4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子
5 I9 k% o  E2 A$ \. K4 e4 a- v! v: k  I' r) Q: c! {7 ^/ \
你说的减半使用是所用荧光抗体量减半吗？还是细胞量减半？我不是太了解具体的参数设计，但是这个图是采用lin/log双参数显示的，应该还是比较合适的

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子. c6 F3 K3 a, C% J3 n% }
9 l* n! I* z! N
这个可以试试，非常感谢

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子  K, g7 y; z& l) `

: j  `; l# U& y- P0 I你们的图跑得很漂亮啊，死细胞和碎片都很少。
5 J- D3 g- h8 L再想问一下：" c/ u& m8 M2 p. y5 o* t% |
1、你们采用抽血的方式分离单个核并一直使用培养培养的CIK吗？还是机采用培养袋培养的呢？这是检测的第几天的细胞？
3 s. P  k+ S: G" u2 `  A6 z% d2、你们买的哪个公司的抗体呢？CD56-PE买的是哪个克隆号呢？
5 z* X) f2 h( X* ?# h3、你们是用哪个款式的流式细胞仪做的检测呢？0 {; w+ Q. c' \) R
问题有点多哈，烦请不吝赐教~

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子( g0 \  y) v7 }

4 c' J% G9 \5 F8 Y; l想请教一下分离外周血PBMC如何使用培养袋养CIK？培养袋体积和初始培养基量有多大？还有初始密度是多少？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子5 B( N- [3 |* n5 y  j+ V( d- T' ~- G
9 `; l% J/ @* M( a8 I- y
想请教一下你们一开始用多大瓶子养呢？贴壁处理时，加入瓶子内的单个核细胞密度是多少呢？贴壁结束后，悬浮细胞会不会产生细胞粘连呢？