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本帖最后由 细胞海洋 于 2013-12-26 13:12 编辑
: _ E; U: z/ K" e' {/ R7 c v. b! a
1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔. S, b7 R7 R4 e' H
约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。
3 E' ~8 s$ \% H7 Y7 w/ W( E" ?% O2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48
3 s0 `7 h" S7 F; Z小时)。7 Q2 z; L& w* ]! O
3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可
/ Z0 v1 e3 S/ A5 p4 l. i+ _以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检
" G& h+ z- p/ K8 U/ a. c, U测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。& ]- D2 I* y8 p5 _3 X( ]' `$ }
4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小
8 y6 b7 ]+ o) Z& D" D% N时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
% r# n0 E: l1 v: @ u* f5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品
( Y7 x2 T l% P |为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。3 H% y3 X+ j+ x3 E6 f. k
6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保, C6 z+ y: t. W& Q
存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。
* F/ C; g- R5 [1 j# i, R |
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发表于 2013-12-24 16:56
