cck8

linlin532775462

请教各位师兄，师姐，具体怎么用cck8来检测细胞增殖呢，最后绘制生长曲线呢，每个孔都有加cck-8吗，空白对照怎么设呢，谢谢各位前辈了
% I6 r  o1 s% U，

johnkye

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( l4 [& v' ]# c1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔
. d$ R" U1 R& T. w2 y约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。/ A6 o" C+ E+ B+ n$ D5 J
2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48
: H* ?6 v4 d- b. Z! o& s小时)。
+ U9 ~" @/ f: {1 E$ r  B* t3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可
4 q, G; k( U; k3 G0 z0 z( D以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检
/ N1 I4 p9 w+ \; o- Z, ^. w测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。. r5 Y# d4 Y$ i+ @* v
4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小/ Q1 ^' z4 b$ {" D
时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
# z' I1 J/ t* Y' m- {: h5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品
  u7 T7 J' A7 t* w% Q* ?为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
: e" u: J1 Q/ P6 I9 C! o6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保
/ I* z/ C, s& s& Z; R! ?存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。. I' }# j! r% _" }. Y' O1 s- z

18605313076

这个和MTT检测原理差不多，只不过比MTT更为方便，不用加DMSO溶解。而且也适合悬浮细胞。空白对照组：就是不加细胞，只含培养基的组。同时你还要设置阴性对照组：只加细胞不加药物的组。具体的说明书网上都有，你可以参考看看。

如醉如痴的

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您好，我想问一下，那个特定药物刺激，是什么药物呢