关于悬浮培养癌细胞球中低粘附培养的问题

sxltc

各位前辈，我看了文献中说需要用低粘附的孔板来养癌症细胞以获得细胞球，有的人说可以在孔板底部加明胶效果不错，我想问的是，本身已经是低粘附的孔板了，还需要加明胶吗？还有我们实验室只有低粘附10cm的dish, 我想用48或者96孔板做实验的话，如果不是低粘附的，是不是可以配明胶然后铺在板底，然后起到低粘附的作用？如果可以的话，这个明胶是什么浓度，如何加呢？谢谢

maiweiqian

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% M. {, N4 R( \1 W3 S: r: ^3 `
* |8 Z! G6 s, U+ V3 L" w: V3 ^低粘附的10cm dish你觉得效果如何？明胶我未试过，琼脂我倒是试过，效果一般般。

刘慧瑾

1%明胶

sxltc

各位前辈，我又看到说用琼脂糖 具体是这样的  pheres of cells grown on FBS were obtained from cells grown on 1% agar layer for 7–10 days with medium change every 2–3 days and isolated from single cells by sedimentation.
+ J) ~1 \( }- N* F+ \5 a我现在彻底困惑了

sxltc

回复 maiweiqian 的帖子& Y, ]1 ?! s& J4 f+ A! _

! @  F0 y4 v+ o* y) E. H1 l我觉得用10cm的dish养太奢侈了，那些生长因子和培养液很贵的啊~

sxltc

结合我这两天看的东西，我觉得明胶和琼脂糖是差不多的作用，是增加粘附的。一般是养内皮细胞或者胎干细胞时用的方法。可以黏住细胞，我想是不是这样的方法其实有利于做悬浮细胞的免疫荧光，因为可以省去离心的步骤，可以直接在孔板上敷抗体.这样就不会损失细胞.不知道我的理解对不对

leiwang

明胶和琼脂不一样。明胶包被可以增加细胞对培养板的粘附性，琼脂恰恰相反，覆盖了培养板，导致不能粘附或者低粘附。

superlamp

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* h( ]7 w6 W4 R1 ^/ w2 Z这样做荧光的话背景会很高的，而且很容易黏上细胞后细胞就不长了

maiweiqian

回复 superlamp 的帖子% V: Y2 h* t) E8 e
$ p- }4 n' n+ ~9 f
想问一下前辈，如果悬浮细胞球做免疫荧光可以怎么操作呢？我怎么觉得是困难重重啊

superlamp

回复 maiweiqian 的帖子/ r, B+ o2 n7 X8 H8 I' L

* U* P2 r% ?- m: E- n9 |$ b用层黏连蛋白铺片子，粘住细胞做爬片，或者把细胞吹散了也行，看你具体做什么了