关于悬浮培养癌细胞球中低粘附培养的问题

sxltc

各位前辈，我看了文献中说需要用低粘附的孔板来养癌症细胞以获得细胞球，有的人说可以在孔板底部加明胶效果不错，我想问的是，本身已经是低粘附的孔板了，还需要加明胶吗？还有我们实验室只有低粘附10cm的dish, 我想用48或者96孔板做实验的话，如果不是低粘附的，是不是可以配明胶然后铺在板底，然后起到低粘附的作用？如果可以的话，这个明胶是什么浓度，如何加呢？谢谢

maiweiqian

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低粘附的10cm dish你觉得效果如何？明胶我未试过，琼脂我倒是试过，效果一般般。

刘慧瑾

1%明胶

sxltc

各位前辈，我又看到说用琼脂糖 具体是这样的  pheres of cells grown on FBS were obtained from cells grown on 1% agar layer for 7–10 days with medium change every 2–3 days and isolated from single cells by sedimentation.
! l( X  x# ?2 w" j0 p我现在彻底困惑了

sxltc

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我觉得用10cm的dish养太奢侈了，那些生长因子和培养液很贵的啊~

sxltc

结合我这两天看的东西，我觉得明胶和琼脂糖是差不多的作用，是增加粘附的。一般是养内皮细胞或者胎干细胞时用的方法。可以黏住细胞，我想是不是这样的方法其实有利于做悬浮细胞的免疫荧光，因为可以省去离心的步骤，可以直接在孔板上敷抗体.这样就不会损失细胞.不知道我的理解对不对

leiwang

明胶和琼脂不一样。明胶包被可以增加细胞对培养板的粘附性，琼脂恰恰相反，覆盖了培养板，导致不能粘附或者低粘附。

superlamp

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( f- M. I; U: C$ a$ \# |6 {  p& F- ]
这样做荧光的话背景会很高的，而且很容易黏上细胞后细胞就不长了

maiweiqian

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想问一下前辈，如果悬浮细胞球做免疫荧光可以怎么操作呢？我怎么觉得是困难重重啊

superlamp

回复 maiweiqian 的帖子. r0 Q7 [! p. h; \

/ _3 F& D" W4 ?) w# |8 x7 b5 H" N用层黏连蛋白铺片子，粘住细胞做爬片，或者把细胞吹散了也行，看你具体做什么了