大鼠生精干细胞的培养

sunny218

各位高手们，我才开始做SSC，做了两次都不是很成功，想向各位高手们请教一下。
$ ?5 `2 f) t+ \1，要用什么方法去分离纯化大鼠的生精干细胞会比较好？6 f5 f  x$ l8 S' F. _- m6 E! B7 ]
2，用什么培养基才能在体外长期培养？3 @( ^0 [0 I  A0 ?& A% H4 `6 W
1 m% |* z. ]; C4 ^- _% U

; r: B7 ?+ T& z  D( H9 l          谢谢各位啦！！！

490096812

刚开始，你就用普通的就可以

sunny218

普通的什么啊？DMEM？还是DMEN/F12  ?

490096812

都行，我们第一种撒

细胞海洋

回复 sunny218 的帖子* _, J2 h1 J0 F8 Q. d8 k

! B3 T+ d( K1 O你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样9 d. N, G8 Y! f) v, w/ q& J1 A- Q
7 \! B) ?3 a3 ]+ d& g$ r& T  Z
否则他会看不到4 N5 o: Z: S5 ~: w! ^2 P) i

sunny218

回复 细胞海洋 的帖子8 S' Q& J9 s- t
* W7 e4 i# @) S- N: @' J8 t2 ]) T4 l  v
好的，谢谢！

sunny218

回复 490096812 的帖子2 a* `% E; J9 S% B9 R1 g5 C
( U$ n1 L3 w+ S# B! N8 x
那你们适用什么方法分离纯化的啊？怎个过程都是要无菌的吧？我可能是不太熟悉，经常会污染，要么就是细胞第二天就都死啦！！！谢谢你的回复啊！！

w343989328

回复 sunny218 的帖子6 ?# W% d% j' ?5 H

) c- p6 M2 X# K& g! |* e0 s为什么会那么容易污染呢？你分原代细胞，培养基里面肯定要加双抗的啊。起码传个一两代再把双抗去掉吧

w343989328

纯化的话，视你的目的而定。如果只是单纯的建系，而且还处于摸索阶段，那么我建议你用差速贴壁法。这是比较经济的做法，而且现在大鼠SSC的marker尚无定论。SSC的培养体系比较复杂，具体的你可以看点文献再做决定。brinster团队和T.shinohara都是这方面的大牛，Dym Martin也有不少工作

qingchen

回复 sunny218 的帖子3 s7 \9 `/ L- d* \+ P$ E8 X
2 E8 V1 C( t. X
两种抗生素没加么？还是液体没有消毒？还是消毒方式有问题？还是操作时未注意无菌？总之污染的因素很多！有时候即使液体有一点细菌的话也会感染的！另外你用什么牌子的滤膜：？滤膜不干净也可能造成污染啊！