大鼠生精干细胞的培养

sunny218

各位高手们，我才开始做SSC，做了两次都不是很成功，想向各位高手们请教一下。2 q6 Z  m1 k: }- a) U3 m0 W
1，要用什么方法去分离纯化大鼠的生精干细胞会比较好？
9 g4 g5 W9 @" x. p1 p2，用什么培养基才能在体外长期培养？
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' H1 e$ P* G+ T- r3 s; U3 o2 d. [
- a3 p4 H4 B- F8 H: s8 F# A          谢谢各位啦！！！

490096812

刚开始，你就用普通的就可以

sunny218

普通的什么啊？DMEM？还是DMEN/F12  ?

490096812

都行，我们第一种撒

细胞海洋

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) L) X- C6 x' J6 J9 O7 j4 F! m9 x$ L, ~
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否则他会看不到
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sunny218

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好的，谢谢！

sunny218

回复 490096812 的帖子, g% V) Q, t3 H, G8 H0 ?; o1 {$ {

! e$ ^, x4 Z0 k0 ^$ K那你们适用什么方法分离纯化的啊？怎个过程都是要无菌的吧？我可能是不太熟悉，经常会污染，要么就是细胞第二天就都死啦！！！谢谢你的回复啊！！

w343989328

回复 sunny218 的帖子' s' H8 D$ J6 U$ e2 f; Y

( b3 ^4 c' F& V" Q为什么会那么容易污染呢？你分原代细胞，培养基里面肯定要加双抗的啊。起码传个一两代再把双抗去掉吧

w343989328

纯化的话，视你的目的而定。如果只是单纯的建系，而且还处于摸索阶段，那么我建议你用差速贴壁法。这是比较经济的做法，而且现在大鼠SSC的marker尚无定论。SSC的培养体系比较复杂，具体的你可以看点文献再做决定。brinster团队和T.shinohara都是这方面的大牛，Dym Martin也有不少工作

qingchen

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4 ]5 Q2 B; T4 p* d0 f0 [; m两种抗生素没加么？还是液体没有消毒？还是消毒方式有问题？还是操作时未注意无菌？总之污染的因素很多！有时候即使液体有一点细菌的话也会感染的！另外你用什么牌子的滤膜：？滤膜不干净也可能造成污染啊！