大鼠生精干细胞的培养

sunny218

各位高手们，我才开始做SSC，做了两次都不是很成功，想向各位高手们请教一下。
* T" N' M, `) U9 v# f+ \. H1，要用什么方法去分离纯化大鼠的生精干细胞会比较好？
6 g/ l* E$ T0 l& O2，用什么培养基才能在体外长期培养？
3 q4 u$ k' s3 ?+ T/ D8 G: `
; _6 D& k3 q7 _) Y  o0 V/ y/ J" t2 g: v  Y) B) ^# W9 l. I
          谢谢各位啦！！！

490096812

刚开始，你就用普通的就可以

sunny218

普通的什么啊？DMEM？还是DMEN/F12  ?

490096812

都行，我们第一种撒

细胞海洋

回复 sunny218 的帖子( i* i8 [6 F+ E6 K2 k! L+ r3 c
9 c! ^" C! r# F' i# w' d
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样: S0 D  R; K: Q- Z6 A; Q2 ]
5 I' B. }' O* _9 y2 i
否则他会看不到
4 L. I1 n: [* L3 Q& T, G

sunny218

回复 细胞海洋 的帖子
3 n$ t: ?# b: X. X* C! C
& U  M, ]' K+ `$ d8 a; V" F好的，谢谢！

sunny218

回复 490096812 的帖子8 Z0 ]& O- d0 l1 Q1 P5 h0 n
+ U6 A: a. m. P$ S  d' o4 G& o8 T9 d
那你们适用什么方法分离纯化的啊？怎个过程都是要无菌的吧？我可能是不太熟悉，经常会污染，要么就是细胞第二天就都死啦！！！谢谢你的回复啊！！

w343989328

回复 sunny218 的帖子" W" P. g+ v! F; I+ i: }

/ Z, K7 Q1 p8 c2 I6 f/ d为什么会那么容易污染呢？你分原代细胞，培养基里面肯定要加双抗的啊。起码传个一两代再把双抗去掉吧

w343989328

纯化的话，视你的目的而定。如果只是单纯的建系，而且还处于摸索阶段，那么我建议你用差速贴壁法。这是比较经济的做法，而且现在大鼠SSC的marker尚无定论。SSC的培养体系比较复杂，具体的你可以看点文献再做决定。brinster团队和T.shinohara都是这方面的大牛，Dym Martin也有不少工作

qingchen

回复 sunny218 的帖子
) S/ |! d% y8 s* e6 w/ Y2 h. I& M4 M9 i, F5 i
两种抗生素没加么？还是液体没有消毒？还是消毒方式有问题？还是操作时未注意无菌？总之污染的因素很多！有时候即使液体有一点细菌的话也会感染的！另外你用什么牌子的滤膜：？滤膜不干净也可能造成污染啊！