请问一下，如何确保6孔板中每个孔加50个肿瘤细胞？

cyz3057

如题目所述，现在做细胞，看文献有说要每孔50个细胞，这个换算下来应该每孔加多少ul的单细胞悬浮液呢？

cyz3057

回复 仰天 的帖子6 S: W& ?4 w5 \& d  Y6 Q8 V

) s# w; W, T0 V哦 客气的 以后多交流

仰天

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0 W- |) F( B! T* G! m3 L) U- K6 p8 [5 s) H; X& O8 l1 @# B) j
谢谢，因为没做过生长周期方面的实验，所以对这方面就没注意过。

cyz3057

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8 \2 L/ ?, Z% E, z' i8 Z8 A- f
+ V2 W/ i  K/ K. K哦 我和师姐也交流了一下 基本不考虑每瓶细胞之间的生长状态的差异 我个人觉得 如果做提取rna 蛋白等可以忽略不计 但是做比如分析生长周期等 还是要注意一下 比如采取同一细胞 不同培养瓶 分组去测 细胞的生长周期

仰天

回复 cyz3057 的帖子- I" |) S. X1 T- |
  Q1 o* n; J* \9 _$ r/ m
可能是我做的不够严谨，对于同一种细胞如果要几瓶或几皿一块消化，混合起来一块离心的话，我还真没有考虑过不同瓶子或皿中细胞的差异性。如果需要考虑差异性的话，能告诉我为什么吗？谢谢！

cyz3057

回复 仰天 的帖子! k- q% W6 C' |% w4 I
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恩恩，好的，昨晚做实验就用了这个方法计数，不过没做好，第一次估计细胞密度，担心细胞密度不够，直接悬浮了四瓶细胞，为了均一性，将四瓶细胞混在一起了，最后又弄的密度很大，又得稀释。请问一下哦，你们做细胞实验，怎样避免每瓶细胞之间的差异性呢，还是忽略不计。谢谢指导。

仰天

回复 cyz3057 的帖子8 l# K4 \2 ?: L, b8 g: {% ]

5 z( V$ c" I# H. N: W5 _' y我们细胞计数都是用计数板的，就是一个载玻片和一个盖玻片，显微镜下在载玻片的中央位置是计数位置，该计数位置有四个大正方格，每一个正方格又由小的16个正方格组成。计数的时候盖上盖玻片（盖在计数位置上），吸取10μL的细胞悬液打到载玻片和盖玻片的间隙中，不要有气泡。然后你计数，举个例子你在四个大方格计数是10，20,15,15，那你最终的细胞数是这四个数相加除4，然后乘以10^4，即15X10^4/mL，也就是说你计数的原液中，每mL中含有15X10^4个细胞。然后你再根据你要加的细胞数计算你要吸取的体积。

cyz3057

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哦 谢谢哈 我的细胞昨天看了下 基本能长到70%左右的样子 我不大知道在计数时滴多大体积的细胞悬液 网上都说滴一滴 这样到时怎么能够知道滴了多大的体积 那总的细胞数又怎么知道呢

cyz3057

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恩恩 thanks

cyz3057

回复 genedu 的帖子& J) J" ?. ~5 O7 r
4 u1 G9 N$ S" c
哦 不好意思 这几天实验忙的 再请教一下哦 那我现在要计数培养瓶内的细胞数 里面有3ml的培养基 我消化后 离心 用3ml培养基重悬成单细胞悬浮液 取多少体积的细胞悬液用来计数呢