求助：关于BMC复苏再培养的问题

听不到

我提取的大鼠的骨髓间充质，传代培养的都挺快的，但是一旦冻存了，再复苏培养的话就会长得特别慢，而且看上去也不是长梭形而是有点伸展开了，想知道有同学出现这种情况的吗？怎么解决的啊？我冻存的条件是DMEM：血清：DMSO=6:3:1,因为舍不得用血清...

zhrt

回复 听不到 的帖子
3 u6 D( N1 c+ z2 f
/ ^2 [; N. J$ K7 \% e" h你试试4:5:1，还有与冻存密度有关

听不到

回复 zhrt 的帖子
4 Q7 }) n1 G; q; i0 o: ?7 l" {" Y9 F$ T. d6 t7 V% A/ d( ]
但是我之前用过血清：DMSO=9:1，复苏后也是这样的，冻存密度大概是一个100ml瓶长满后冻两管，一管1ml冻存液

zhrt

回复 听不到 的帖子6 B! H% A8 p# k
$ i+ ?" z9 U& P9 w
你没计数吗？冻存密度要低点

听不到

回复 zhrt 的帖子( O+ x5 ], G: S$ X
2 J3 p3 e, E! k/ \) a% B- T
没计，因为之前冻肿瘤细胞大概就是这样冻，所以就没计数...不过冻存密度会对细胞有这么大影响吗？感觉都没有干性了...我对F4代细胞提了RNA做了RT-PCR，以OCT-4为引物，完全没条带，对照的beta-actin条带就特别亮，愁死了

zhrt

回复 听不到 的帖子- l2 G# Q; X0 e: {7 I* [7 i( u

9 m6 G& N. C$ s) v$ Y复苏后接种密度多大，活细胞数怎样？

听不到

回复 zhrt 的帖子
( r+ i, A( g6 U8 n6 a2 U' D
& [! ?( d% `& R) s复苏是一管种到一个100ml瓶的，因为我觉得他特别难贴壁，就隔天才看，看的时候已经贴壁了大概50%，还挺好的，但就是细胞形态不对

zhrt

回复 听不到 的帖子
/ C; P% v1 G( [" n8 d* ^2 S# {- P
% c2 O3 m5 T: c# c: F, I  `) F) I冻存的第几代？会不会有老化现象

听不到

回复 zhrt 的帖子
( r# _# g7 |% G# ]2 Y# h+ L5 u
, ~! c. G% D9 U! Y  |5 T. v  L冻的第3代，按说是不能这么快就老化的

zhrt

回复 听不到 的帖子
7 \; o0 {, I% h8 m# H9 z/ K; f. {9 l6 q3 c! t3 `5 n( m0 U7 e  e
你在找找看看是不是胎牛之类有啥改变。不过我还是怀疑是不是冻存条件的问题，像密度过高，冻存液的比例，时间的把握，液氮的覆盖率等