大鼠MSC的消化和计数

倒腾细胞

1、加3ml的胰酶在T75的瓶子里消化细胞，目测总感觉3ml的量少了点（虽然效果基本过得去 ），不知各位前辈有类似经验可以指导下吗？
8 M: }8 L- s; A+ d, |2、忘记计数这个步骤，原瓶传代后用枪头尖端残留的液体计了下数，为13乘以10的4次方。这个当然不能准确代表传代密度，小辈想请教下在正规操作时，细胞计数的价值性以及前辈们传代计数一般都是多少呢？

屋檐上的乌鸦

我一般用2ml左右，消化2min就可以都消化下来了

wuzhongqi

回复 屋檐上的乌鸦 的帖子. |1 A1 N4 c  X& }: o; w7 ]: W
$ A6 x0 R9 [$ k5 {. X
75的瓶我一般加1ml胰酶和1ml生理盐水

倒腾细胞

回复 wuzhongqi 的帖子5 R7 h" A' T9 i3 T, ~6 p

& F8 j/ [) g8 V5 \3 x6 N  o# r哦？还有生理盐水？这有什么讲究吗？

wuzhongqi

1:1加的   主要是稀释胰酶

倒腾细胞

回复 wuzhongqi 的帖子0 [& S8 @# x2 z! {, }

( u! l5 A1 y2 L, O% H前辈为什么要稀释胰酶呢？我们的酶和浓度就是按照文献来的~

wuzhongqi

我们用的是0.25%的EDTA     加1倍生理盐水稀释

屋檐上的乌鸦

wuzhongqi 发表于 2014-7-2 17:18 $ r: A4 I1 ?! z7 L# p
回复 屋檐上的乌鸦 的帖子! d1 i3 `# e$ u/ c' O

% o) `& f; M: {0 Y' M2 ]! h/ c75的瓶我一般加1ml胰酶和1ml生理盐水

% ^1 ~/ [- G$ `; n/ a+ I你是稀释胰酶大的浓度的吧。

屋檐上的乌鸦

倒腾细胞 发表于 2014-7-3 20:30 " r8 Z6 a1 ?8 M- c
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1 ]- C, e4 D) A5 Z  @; y9 e8 e9 ]; T1 N2 Q  z/ V$ x
前辈为什么要稀释胰酶呢？我们的酶和浓度就是按照文献来的~

) f' s/ r) T- |; E* x+ V" E) Y4 `稀释完的效果和没稀释的效果差不多的！我也用过

wuzhongqi

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一方面1ml酶在75的瓶中太少，不容易完全接触细胞，另一方面稀释过后避免没直接作用于细胞