精原干细胞建系交流--发现培养液变黄，细胞逐渐死亡

20111109

问：各位大侠们，最近遇到问题，我现在做小鼠精原干细胞体外建系，发现到F3代培养液变黄，细胞不见生长，再传代的细胞状态很差，贴壁性不好，逐渐就像枯掉一样，换液就几乎没有sscL .
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3 E" K6 |, L4 H8 U2 r请问这里有好心的亲们能帮我分析一下原因么，万分感谢呢。

奋斗的时光

有没有可能是分化了，或者培养基中的某些养分刺激了精原干细胞的凋亡？4 B7 z$ j1 R8 F8 \
精原干细胞的培养基成分是个很重要的因素。4 C+ s% s8 q" p
但是如果照你所说，贴壁都不怎么好，吸出来都不剩啥了的话，这个细胞状态就太差了。8 ]$ [) L; Z& s" R/ ^
也建议重新分离把。

saifast00

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+ _9 b7 S1 Z, T4 Y7 Q细菌真菌污染都会变浑浊变黄，还有变黄主要是因为培养基PH变酸，看看你的孵育箱CO2是不是偏高？

20111109

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, }* m2 x9 @6 G- g+ k+ B
* X* L* ]% D$ j" L# ~; d. S是么？ 那请问培养液隔夜变黄有哪些原因呢？我都快崩溃了 ，找不到原因，细胞就一直死下去了。

w343989328

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5 Y6 i# g! d) [7 ^+ U
5 o. P9 @  e: w5 }& ^会变黄变得很快啊，因为营养被抢夺啊

saifast00

回复 w343989328 的帖子& [% W4 d5 V' c  S4 l) M

1 S2 z, r  z) r6 O支原体感染培养基是不会有明显改变的吧？？

w343989328

回复 20111109 的帖子/ \' T/ y& I* K( G' u

$ ^: z2 h: D% a2 y/ [: o0 X嗯 做个支原体检测吧  就个PCR而已

20111109

回复 w343989328 的帖子, b4 _" a; }. H+ }
/ D9 [2 k. N* z( h; Q1 k
我的细胞最先出现的是不分裂，细胞散在存在，几天以后有部分细胞会飘起来，在培养空的中间液体中悬浮着很多细小的细胞，换液之后，细胞就越来越少，最后细胞就像崩解了一样，我也不清楚是不是支原体，培养液是会变黄的。

w343989328

支原体主要两个来源，一个是血清，一个是动物本身，即使是SPF级也很难避免。我们之前分离耳朵的纤维细胞一直出现支原体，SSCs还好，所以我猜，你可能在分离细胞过程中被支原体污染了。支原体一般不会直接导致细胞死亡，只是和细胞争夺养分，导致细胞状态逐渐变差，是一个比较慢性的过程。而且，细胞培养基迅速变黄，是支原体污染一个特征。

20111109

回复 w343989328 的帖子! x# N! \- G' ~2 \$ D9 ]

7 I+ l+ B: B, q我不理解 你的意思是支原体来源于小鼠 可是我的细胞从建系到F3代时间有20多天了 这段时间支原体是一直在潜伏状态么？