精原干细胞建系交流--发现培养液变黄，细胞逐渐死亡

20111109

问：各位大侠们，最近遇到问题，我现在做小鼠精原干细胞体外建系，发现到F3代培养液变黄，细胞不见生长，再传代的细胞状态很差，贴壁性不好，逐渐就像枯掉一样，换液就几乎没有sscL .
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: x$ b7 K: ^1 F( C# T9 s请问这里有好心的亲们能帮我分析一下原因么，万分感谢呢。

w343989328

feeder状态呢？支原体？

20111109

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feeder挺好的 我也怀疑过是支原体

20111109

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如果支原体污染 我该怎么办呢 或者怎样预防比较好 万分感谢

w343989328

很难避免的，我们也只能这样做：SPF级拿出后迅速开始实验，不要在外面晾太久；杀死小鼠后，酒精浸泡数次；解剖小鼠的时候，手术器械分开用，碰到皮毛的就不要碰内脏；建系后，取上清检测支原体，当然feeder也要事先检测；如果污染，有一些药物可以杀的，但效果似乎不是特别好。你如果只传到P3，我的建议是重新分离。

20111109

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7 D+ s% k# [7 l) p我不理解 你的意思是支原体来源于小鼠 可是我的细胞从建系到F3代时间有20多天了 这段时间支原体是一直在潜伏状态么？

w343989328

支原体主要两个来源，一个是血清，一个是动物本身，即使是SPF级也很难避免。我们之前分离耳朵的纤维细胞一直出现支原体，SSCs还好，所以我猜，你可能在分离细胞过程中被支原体污染了。支原体一般不会直接导致细胞死亡，只是和细胞争夺养分，导致细胞状态逐渐变差，是一个比较慢性的过程。而且，细胞培养基迅速变黄，是支原体污染一个特征。

20111109

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+ {; p! r' ~3 Q: e我的细胞最先出现的是不分裂，细胞散在存在，几天以后有部分细胞会飘起来，在培养空的中间液体中悬浮着很多细小的细胞，换液之后，细胞就越来越少，最后细胞就像崩解了一样，我也不清楚是不是支原体，培养液是会变黄的。

w343989328

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嗯 做个支原体检测吧  就个PCR而已

saifast00

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支原体感染培养基是不会有明显改变的吧？？