Taqman探针法——PCR体系的建立

xiaolong523

1、引物、探针的设计：
% F/ H. w& b2 ]3 N# G: E      探针Tm为68-70℃ ，<30 bp, 5’不能有G，G可能会淬灭荧光素，
; i3 ~# S2 u; W# k       引物尽量靠近探针，扩增片段<400 bp，引物Tm为59-60℃
1 S0 z1 B& t( J0 M7 `. A
/ @( j; D) ?) U% G2 d, b) k2、反应参数的确定：
" f7 ~7 I* _# j$ e/ ]% C       一般为：94 ℃，10-20S
1 d$ v2 F7 Q6 _3 G* j                        60℃，30-60S（Taq酶5′→3′外切核酸酶活性在60℃ 最高），也可通过温度梯度优化退火温度" p1 {( f8 e; w! t( x3 l
                     3 h" e* X- q9 N
3、优化引物和探针浓度：获得最小Ct值，最大信号/背景比值8 d5 e+ W: m1 A* r2 ~9 q
       引物浓度：50-900nM
- k! t# T* c8 b8 v! A) X% j( e: h       探针浓度：50-250nM
0 i& [% U' ^7 r1 J

Tlexander

回复 xiaolong523 的帖子. G  y3 _0 \, \" F+ H: U# s
. u$ q/ q- p2 ~3 S7 q! }9 a
多来点科研新闻，或农大生科院的最新消息或科研进展