关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：
" a9 Y9 M( ^! K. x- N分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,/ M7 B7 k" Z0 |5 e
可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED
7 P6 v6 h$ \7 J* @1 z为什么Tris的浓度不一致呢
. `1 `: N) j$ ]" r1 l) g请教各位老师
" J2 ]( `6 m/ H2 i1 O/ o; [

qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

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" m! k/ ?- k, o8 C9 m( I. R% R: T% W& O
我写的这个是分离胶
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moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

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哦，我明白，谢谢
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yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，) l9 R7 j5 s7 f) ?4 _* U5 n
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个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

回复 yinchong42 的帖子1 ?& ?/ A. H0 g1 T" e* w3 j/ v

6 f' x2 i$ K# {# ?谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

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: @+ g8 W# T. t! |" V: Y" x. W" q$ S( W4 q, A; l$ p5 l- u
不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

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. B1 F' s2 N- q! u% a# ^# W好的，谢谢. ?. h! n$ b( G* [3 Z: |