关于WB制胶的问题

shaozi402

我刚开始做WB，查了一些相关资料，发现在制胶的过程中有一些问题：
3 ^# ]7 W8 d! ?; n4 i分子克隆实验指导书上显示为：水，30%丙烯酰胺溶液，1.5mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED,4 R' U$ D! I9 a) o; w
可是在beyotime的凝胶配制试剂盒上却显示为水，30%丙烯酰胺溶液，1mol/L Tris (PH8.8)，10%SDS，10%过硫酸铵，TEMED
0 ]  E- h5 Z, n5 {0 I2 l+ f为什么Tris的浓度不一致呢) G; Y0 ^" p; y6 {
请教各位老师8 o) |$ `) I( l& h

qingxingruyu

不分浓缩胶和分离胶吗，应该都可以吧，而且试剂盒我觉得是优化后的

shaozi402

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0 h" ~0 ?2 n6 S$ `) H9 V! m. F) n9 c% T# i0 |8 m- B  A+ l: B! k
我写的这个是分离胶
2 M& C$ g) i9 D  @' H

moluxingke

一般实验室自己做胶，分离胶用的是1.5M的Tris。看8.8的PH应该是做分离胶用的，对western制胶来说，PH值是很重要的，浓度可能要求没有那么严格，试剂盒应该是一套优化后的体系，应该没有什么大问题。

shaozi402

回复 moluxingke 的帖子1 W0 e3 ^1 m5 w- ?# `* Q0 _
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哦，我明白，谢谢- V1 v) C0 z$ [  x! K3 n

yinchong42

很多时候，一些试剂用量需要灵活控制的实验，在掌握操作的同时也要弄清楚各个组分是干什么的，比如SDS-PAGE，水的作用是稀释，tris作用是调节PH和凝胶渗透压，蔗糖的作用是增大凝胶密度以免上样蛋白沉落，SDS的作用是变性蛋白，丙烯酰胺过硫酸铵的作用是构成凝胶，temed是催化；在了解了各种成分的作用之后，就可以自己设计实验方案，
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个人建议做western配胶尽量自己配，试剂盒和买来现成的胶大多不如自己配的靠谱

shaozi402

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2 c3 B# R% |+ z) D9 `3 q# }
( L1 o) `& e- O6 U# ]# \( d+ b谢谢您，虽然只有三行字，但是句句都中要害。

yinchong42

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4 g  o0 d, Q& ]; V( M7 q不客气，相互学习！

97b1

这个按照分子克隆的来就行了，或者abcam的指南

shaozi402

回复 97b1 的帖子: i1 n3 t1 e" X# z% K
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好的，谢谢* I( J  I% X( w2 Y/ m/ V- Q+ Z