CIK细胞培养一周死亡

heirrii

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  v! I6 C! m( w7 N2 Q% X( D4 i0 K* M, e
我们也是用的枸橼酸抗凝。你分单个核用ficoll吗，有没有洗涤干净。得到的细胞加入50ml培养基有点稀。

fenlichong

最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

fenlichong

3 n& N+ p8 D/ V5 K$ X( _5 T- l
) \: n# X3 w; _最好附上照片，以确定形态是否正常，有无污染等。你收获的PBMC细胞纯度如何，是否高于90%？接种密度一般1-2×106个/ml就可以，扩瓶的话试试每两天扩一次。添加因子一般还有IFN-γ，培养原理及添加因子可参考此帖http://www.stemcell8.cn/thread-70676-1-1.html。不知按照你添加的因子及培养方式操作的话，你们实验室其他人员有没有出现类似问题？

hefan1234

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4 M6 J7 x- k# r5 d
/ X% G/ e) l- d+ P脐血培养CIK也做过，但没有出现过一周就死亡的现象。血清获得方法是将脐血2800rpm，10min离心，获得的上清56度水浴灭活，1500rpm，10min离心后取上清。我们实验室用的抗凝剂是肝素钠。

sdzhxq

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& F1 ~6 @5 r. D3 s6 D
2 @' J/ y6 |$ J0 K3 |; _8 s0 k增殖差，台盼蓝染色有很多死细胞，显微镜下看细胞感觉细胞不完整

sdzhxq

回复 hefan1234 的帖子. ^1 h* E$ {* Y! H  x
1 ?9 f$ Z# T( @' I0 F# G8 Y9 t
我是用脐血培养的，50ml血，提取大约5x107个细胞，培养基加了50ml，没加自体血清，加上自体血清效果会好吗？血清怎么获取，里面含有抗凝剂呀？我们用的采血袋，里面抗凝剂是枸橼酸钠

我是丁香

我们的经验，不管密度是多少，细胞都不至于会大量的死，最多是增殖差。“死”的含义是什么？溶解消失了？还是状态不好？

hefan1234

回复 sdzhxq 的帖子+ I1 p1 }! n$ V! I9 E6 p* P

. ~! v  Y. Y3 _& U接种浓度有点低，你采血量多少，得到单个核多少，培养基中是否加自体血清了?

lyj-0017

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: G  m* M4 Q& ]1 l
" S0 M4 b, o7 |密度的问题论坛里都有，大家都是建议密度高一点会更好，你可以调到2试试，但相应的D1天可能会出现聚集现象更明显。细胞后期扩增过程中出现细胞集落是良好的生长过程。培养基一般都是商品化的，里面应该都是添加谷氨酰胺的。

sdzhxq

回复 我是丁香 的帖子6 {" e1 ~, a+ ?: @
  R) F. a; U( m1 ?
细胞没拍下来，新手刚做，一共做了3次，都是这样。能够分享您的经验？