无血清培养富集肿瘤干细胞的若干问题

hottodeath

我最近刚开始接触富集肿瘤干细胞，用的是MCF-7，看了大家说的，决定用DMEM/F12，加10ng/mL bFGF ， 20ng/mL EGF，  2%B27，  5μg/mL胰岛素，用低粘附的培养皿，是不是可以了？
' ?9 m" c9 H0 ]# p之前我没加胰岛素，B27也用错了，不是Minus Vitamin A的，还有操作手法等多种原因，没养出来。胰岛素还不知道要买哪种......9 l3 D3 D+ T# |( F( j
好多都不清楚啊，周围也没有在做这个的前辈，只能在这里求大家的指教！！！

hottodeath

有看到用胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠添加剂（insulin-transferrin-sodiumselenitesupplement，ITS），也有Insulin, Human Recombinant, Zinc Solution的，是不是都可以啊

eanhappy

你们都不加双抗吗

木三阿凉

其他的生长因子都好理解，我想问一下各路大神，这个实验为什么要加胰岛素？

细胞海洋

回复 木三阿凉 的帖子, \; N$ V9 W1 Z5 h4 y

. c! T! @# D- B' ?* U. J建议你发新帖提问

木三阿凉

回复 hottodeath 的帖子: z- e' q' P. _: m

6 n- @' d& c0 @3 V- ?我也有相同疑惑，不知道这个问题你现在解决了没有？

hottodeath

回复 木三阿凉 的帖子
' n7 Y" D" s6 M9 w/ P+ Z1 S+ M  q
我也是在论坛里看到的，MCF7需要insulin，有促进蛋白质合成，促进增殖的作用。现在还在养，无血清培养基培养了5天了，没看到几个活细胞（我种的密度很低）。

木三阿凉

回复 hottodeath 的帖子
$ M* U' c3 t( r1 |' j
& _' r- O& N+ r  t/ R' G哦，MCF-7必须要添加insulin吗

木三阿凉

回复 hottodeath 的帖子
8 Q1 [) ~: a) Z3 v3 p# ]' Y" ?2 b! D+ M1 z8 g( z2 g/ m% B
哦，MCF-7必须要添加insulin吗

hottodeath

回复 木三阿凉 的帖子9 I$ e: d3 _: I+ h+ E6 X
, G* ~: z! N" ~' \: z
这个我也不清楚。按以上培养的6天了，MCF-7里面球没看到，活细胞也没见几个了，好悲伤。