实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。' R5 F: V, X. V4 n$ n
1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。! H4 Q. _. L2 N; x6 x7 s# x9 A/ E
2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。
, J- A. u' `$ H6 Q- Y9 M3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。
6 S: j' E# r) I7 F- {9 v/ _% H现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

zxmflying

支原体你是用什么方法测的？所用方法检测阴性不一定就说明你的培养物中没有支原体——因为每种方法都有检测范围的限制。另外，你能排除培养基没有问题吗（如FBS）？建议重新复苏一支试试。

afei198520

回复 维维睡啦 的帖子! p. J1 E3 r0 r$ a
9 D1 T  ^& k. O" q* _) Y
我觉得楼主也应该检测一下血清的内毒素，我们之前买过某进口分装的血清，内毒素超标N倍，绝对没法想象

维维睡啦

你应该测一下内毒素，尤其是血清和培养基的，你们用的血清是否浑浊，有没有絮状沉淀，有的话就是血清的问题。

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子; Z0 Z5 g# U! Z* g; Y4 M9 `& P" `

$ J) f5 u- T0 e6 M可否告知您用的支原体检测试剂盒是那家公司的？我们上次购买了一个却不太好使。

zkfootball

回复 gd541767393 的帖子
9 m/ |4 ]: j3 n9 J1 e2 L" _0 R5 i5 ~9 [
内毒素和病毒感染该怎么检测呢？

zkfootball

回复 dahui 的帖子# E6 N6 ~' ^( U8 G' K
% k* K: ^2 F* c
恩，换个GIBCO的试试

zkfootball

回复 宋红卫song 的帖子) x2 w$ {- k! \* T9 C+ k* I
7 }: k2 i  U0 Y' }7 u2 ^- d5 d/ V
恩，说的有道理。
; {9 }9 P! J3 j% \* ~2 z支原体检测用的是试剂盒，做一个PCR反应，阳性阴性control都正常，我的实验组也没有P出条带。

gd541767393

+ ?# ~1 t9 q- j
# z7 N' Z8 d1 F0 a细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染

dahui

回复 zkfootball 的帖子3 S5 m2 X, A5 w$ s+ T

( D) d) L: X! g8 ]9 }# X! p用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。