实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。
4 b/ b, _0 {4 I1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
( ]4 n1 P, N9 H2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。  C) q; J1 r  e& P6 M! p/ _
3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。: o  O: q0 ~1 y' d0 W& U( {
现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，
5 R9 k/ X0 X. I8 P. C1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？: E5 o' }: d- w  ?, H- [1 s' k# Y6 e# R
2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。
, f# }+ }# j& }4 k3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

: f+ J  h' K; k% {3 H
- q* x8 |5 `. {: P& q
回复 奇幻雪蓝 的帖子
1 s9 [, v, Z/ ]$ z- z9 |
6 t" ^* N1 G1 P2 ]" s) C0 ^

2015-1-29 15:11 上传

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铺下去第一天的滋养层细胞

( K6 I4 h! d5 G2 G! r铺下去后第一天观察滋养层细胞
6 y4 K1 z5 G" _7 Z/ j0 Q( p4 T% F5 c/ O2 g3 q

2015-1-29 15:12 上传

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铺下去第三天的滋养层细胞

# q6 @$ j2 K6 r0 T4 \" \7 T/ b铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

回复 yuanyecat 的帖子
: J5 d% C6 a/ a- k2 z' ]( D& V
: K! m' `  |, U. u) J! z/ f& I1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。
* `' F7 V/ C$ ^- G  j, Y; Q* `+ |2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。3 v7 U# W  g' \& M' o  W! b3 b* ?; k
3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

回复 zarecol 的帖子5 o$ ^. b( p/ y+ v# t2 ^

+ |- C5 e% l( h" p- m好的，多谢！

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子
  j; J; {' T! E6 [" L* p/ V) i8 G5 n" ~9 H# x+ k" ?1 v; D- W
你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

回复 zkfootball 的帖子4 \4 x7 h( R2 t+ ?" g
. t( O  K9 u  @. Y: A7 ]* R$ `
用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

! [/ _0 Q( U' w. q2 a9 `
8 w& ^4 n- E/ j) G# S细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染