实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。' T+ d. o* e$ v, w* t, M
1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。* `6 Z- ?1 W4 q9 e4 E6 z! R% e- g
2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。
! F$ V1 U7 s1 C- s$ e3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。7 a2 ~. P0 _6 {
现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，& W5 A; K' y/ y
1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？( m: G  }0 Q( M4 u, M* {& {
2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。8 ^* T4 a+ Z# ^" R/ q
3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

+ Q* T& S% X3 I- I; P# I
, W9 n  A1 z( R
回复 奇幻雪蓝 的帖子. T* A  j, V% g- Q
! i9 j# Z& C0 j0 S- S5 @9 N

2015-1-29 15:11 上传

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铺下去第一天的滋养层细胞

6 U. X; w" {* j) K0 O
铺下去后第一天观察滋养层细胞
0 g2 m6 s/ m8 J- v! T8 H
7 w( g0 y3 o- U. s; D

2015-1-29 15:12 上传

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铺下去第三天的滋养层细胞

; r6 e. H6 L) K6 ^& I铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

回复 yuanyecat 的帖子( c% t$ p7 v! d. T0 z

9 y% m( I* W% P$ z1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。  F! a: s4 @" L, a8 \
2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。0 R% K; W  f* _8 X6 m8 C6 [
3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

回复 zarecol 的帖子+ {0 N6 t+ D8 g3 B6 `
& Q) J; m& A; M+ q% b- A5 T
好的，多谢！

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子
/ \, ~8 K8 ?' _  I$ Q7 b' w& b9 Z3 {
你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

回复 zkfootball 的帖子
& v% Z6 Y; ?2 {# h& _+ V; {
- B& r5 _1 W, W) f5 c用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

1 G( T, d4 z* c, f2 C3 m; |
+ N3 a8 ^2 `; q( E% b. i
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染