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[请教] 实验室细胞增殖慢,死的厉害     [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2015-1-29 10:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,我们实验室的细胞感觉增值不起来。' T+ d. o* e$ v, w* t, M
1:293T原来2-3天传一次代,但是现在4天都没有达到可以传代的密度。* `6 Z- ?1 W4 q9 e4 E6 z! R% e- g
2:养滋养层细胞(用于支持人的胚胎干细胞),如果是未用丝裂霉素处理过的,第一天贴下去还挺好,但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过,在hESC培液里长得很好,在原先滋养层细胞培养基里(DMEM+10%FBS)就会死的厉害。
! F$ V1 U7 s1 C- s$ e3:已经检测过支原体,发现没有污染。也换过DMEM,FBS,也没有改善。7 a2 ~. P0 _6 {
现在都不敢养细胞了,请大家提一些可能的原因。谢谢!
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沙发
发表于 2015-1-29 11:45 |只看该作者
死的厉害是什么样子的现象?怎么死的?死的时候细胞是什么样子的?有没有变长或变大/变黑?培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不?
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金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2015-1-29 14:29 |只看该作者
细胞死亡的原因,& W5 A; K' y/ y
1.真菌或者细菌污染。你除了支原体,细菌和真菌你检查了吗?( m: G  }0 Q( M4 u, M* {& {
2,培养箱的问题,你检查了你们实验室的培养箱,温度,湿度,二氧化碳浓度都正常吗?不要看指示表,你这种情况是不是培养箱感应器有问题,要自己亲自测量一下。8 ^* T4 a+ Z# ^" R/ q
3,滋养层细胞有问题,你检查了滋养细胞了吗?比如污染等
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板凳
发表于 2015-1-29 15:13 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
本帖最后由 zkfootball 于 2015-1-29 15:14 编辑 + Q* T& S% X3 I- I; P# I
, W9 n  A1 z( R
回复 奇幻雪蓝 的帖子. T* A  j, V% g- Q
! i9 j# Z& C0 j0 S- S5 @9 N
铺下去第一天的滋养层细胞 6 U. X; w" {* j) K0 O
铺下去后第一天观察滋养层细胞
0 g2 m6 s/ m8 J- v! T8 H
7 w( g0 y3 o- U. s; D 铺下去第三天的滋养层细胞
; r6 e. H6 L) K6 ^& I铺下去后第三天观察滋养层细胞
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报纸
发表于 2015-1-29 15:16 |只看该作者
回复 yuanyecat 的帖子( c% t$ p7 v! d. T0 z

9 y% m( I* W% P$ z1:真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧?我这个确实看不出来。  F! a: s4 @" L, a8 \
2:二氧化碳浓度测试过,没问题。我准备再去测测温度和湿度。0 R% K; W  f* _8 X6 m8 C6 [
3:这批细胞原来用都没有问题的,测了支原体,也是阴性的。
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地板
发表于 2015-1-29 16:39 |只看该作者
细胞老化,还有可能是细胞营养不良,检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。
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发表于 2015-1-29 16:55 |只看该作者
回复 zarecol 的帖子+ {0 N6 t+ D8 g3 B6 `
& Q) J; m& A; M+ q% b- A5 T
好的,多谢!

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发表于 2015-1-29 18:27 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子
/ \, ~8 K8 ?' _  I$ Q7 b' w& b9 Z3 {
你饲养层细胞的制作过程是怎样的?如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存,若丝裂霉素处理力度过大,刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的,但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测,用的什么方法,可靠吗?
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金话筒 优秀会员 热心会员 小小研究员 积极份子 帅哥研究员

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发表于 2015-1-30 08:36 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子
& v% Z6 Y; ?2 {# h& _+ V; {
- B& r5 _1 W, W) f5 c用的哪的血清,真心话,现在仿货太多,请留意。
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发表于 2015-1-30 09:07 |只看该作者
本帖最后由 gd541767393 于 2015-1-30 09:09 编辑 1 G( T, d4 z* c, f2 C3 m; |
+ N3 a8 ^2 `; q( E% b. i
细胞如果以前用没问题,现在出问题,,跟细胞本身没有关系,是不是这一批次培养基缺少某种成分,或者说血清有问题,感觉像是营养不足,或者可以测下内毒素,和病毒是否感染
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