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[请教] 实验室细胞增殖慢,死的厉害     [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2015-1-29 10:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,我们实验室的细胞感觉增值不起来。
4 b/ b, _0 {4 I1:293T原来2-3天传一次代,但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
( ]4 n1 P, N9 H2:养滋养层细胞(用于支持人的胚胎干细胞),如果是未用丝裂霉素处理过的,第一天贴下去还挺好,但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过,在hESC培液里长得很好,在原先滋养层细胞培养基里(DMEM+10%FBS)就会死的厉害。  C) q; J1 r  e& P6 M! p/ _
3:已经检测过支原体,发现没有污染。也换过DMEM,FBS,也没有改善。: o  O: q0 ~1 y' d0 W& U( {
现在都不敢养细胞了,请大家提一些可能的原因。谢谢!
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沙发
发表于 2015-1-29 11:45 |只看该作者
死的厉害是什么样子的现象?怎么死的?死的时候细胞是什么样子的?有没有变长或变大/变黑?培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不?
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金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2015-1-29 14:29 |只看该作者
细胞死亡的原因,
5 R9 k/ X0 X. I8 P. C1.真菌或者细菌污染。你除了支原体,细菌和真菌你检查了吗?: E5 o' }: d- w  ?, H- [1 s' k# Y6 e# R
2,培养箱的问题,你检查了你们实验室的培养箱,温度,湿度,二氧化碳浓度都正常吗?不要看指示表,你这种情况是不是培养箱感应器有问题,要自己亲自测量一下。
, f# }+ }# j& }4 k3,滋养层细胞有问题,你检查了滋养细胞了吗?比如污染等
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板凳
发表于 2015-1-29 15:13 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
本帖最后由 zkfootball 于 2015-1-29 15:14 编辑 : f+ J  h' K; k% {3 H
- q* x8 |5 `. {: P& q
回复 奇幻雪蓝 的帖子
1 s9 [, v, Z/ ]$ z- z9 |
6 t" ^* N1 G1 P2 ]" s) C0 ^ 铺下去第一天的滋养层细胞
( K6 I4 h! d5 G2 G! r铺下去后第一天观察滋养层细胞
6 y4 K1 z5 G" _7 Z/ j0 Q( p4 T% F5 c/ O2 g3 q
铺下去第三天的滋养层细胞
# q6 @$ j2 K6 r0 T4 \" \7 T/ b铺下去后第三天观察滋养层细胞
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报纸
发表于 2015-1-29 15:16 |只看该作者
回复 yuanyecat 的帖子
: J5 d% C6 a/ a- k2 z' ]( D& V
: K! m' `  |, U. u) J! z/ f& I1:真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧?我这个确实看不出来。
* `' F7 V/ C$ ^- G  j, Y; Q* `+ |2:二氧化碳浓度测试过,没问题。我准备再去测测温度和湿度。3 v7 U# W  g' \& M' o  W! b3 b* ?; k
3:这批细胞原来用都没有问题的,测了支原体,也是阴性的。
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地板
发表于 2015-1-29 16:39 |只看该作者
细胞老化,还有可能是细胞营养不良,检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。
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发表于 2015-1-29 16:55 |只看该作者
回复 zarecol 的帖子5 o$ ^. b( p/ y+ v# t2 ^

+ |- C5 e% l( h" p- m好的,多谢!

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发表于 2015-1-29 18:27 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子
  j; J; {' T! E6 [" L* p/ V) i8 G5 n" ~9 H# x+ k" ?1 v; D- W
你饲养层细胞的制作过程是怎样的?如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存,若丝裂霉素处理力度过大,刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的,但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测,用的什么方法,可靠吗?
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金话筒 优秀会员 热心会员 小小研究员 积极份子 帅哥研究员

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发表于 2015-1-30 08:36 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子4 \4 x7 h( R2 t+ ?" g
. t( O  K9 u  @. Y: A7 ]* R$ `
用的哪的血清,真心话,现在仿货太多,请留意。
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发表于 2015-1-30 09:07 |只看该作者
本帖最后由 gd541767393 于 2015-1-30 09:09 编辑
! [/ _0 Q( U' w. q2 a9 `
8 w& ^4 n- E/ j) G# S细胞如果以前用没问题,现在出问题,,跟细胞本身没有关系,是不是这一批次培养基缺少某种成分,或者说血清有问题,感觉像是营养不足,或者可以测下内毒素,和病毒是否感染
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