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[请教] 实验室细胞增殖慢,死的厉害     [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2015-1-29 10:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,我们实验室的细胞感觉增值不起来。
) U6 @' j6 w+ ?$ u1:293T原来2-3天传一次代,但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
; ?/ w! _& T1 E) Q: @2 T; t3 n2:养滋养层细胞(用于支持人的胚胎干细胞),如果是未用丝裂霉素处理过的,第一天贴下去还挺好,但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过,在hESC培液里长得很好,在原先滋养层细胞培养基里(DMEM+10%FBS)就会死的厉害。6 ~, j( h7 ^% q' B* M6 A
3:已经检测过支原体,发现没有污染。也换过DMEM,FBS,也没有改善。7 w1 {+ e2 J" |
现在都不敢养细胞了,请大家提一些可能的原因。谢谢!
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沙发
发表于 2015-1-29 11:45 |只看该作者
死的厉害是什么样子的现象?怎么死的?死的时候细胞是什么样子的?有没有变长或变大/变黑?培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不?
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金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2015-1-29 14:29 |只看该作者
细胞死亡的原因,
/ J6 I; p' S6 e- V" D9 X% u- C1.真菌或者细菌污染。你除了支原体,细菌和真菌你检查了吗?
) k/ I: I4 G9 t4 A- `8 C* e+ M2,培养箱的问题,你检查了你们实验室的培养箱,温度,湿度,二氧化碳浓度都正常吗?不要看指示表,你这种情况是不是培养箱感应器有问题,要自己亲自测量一下。
8 X) f2 P0 g0 n* j! U) \% o3,滋养层细胞有问题,你检查了滋养细胞了吗?比如污染等
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板凳
发表于 2015-1-29 15:13 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
本帖最后由 zkfootball 于 2015-1-29 15:14 编辑
6 w/ f$ q& F9 o/ V% h1 _$ ^# ~, a1 c( R- x! f
回复 奇幻雪蓝 的帖子. x# n5 f' w2 S0 F5 a, V

4 S; A- a5 |- k9 B/ T* O2 o, P 铺下去第一天的滋养层细胞
0 J' M0 m+ W& u$ W" U( m铺下去后第一天观察滋养层细胞/ z+ ~: f% t7 L7 N2 p6 f

5 V( S5 q2 c0 M5 L 铺下去第三天的滋养层细胞 & ~. ]: |% n0 g* H2 P$ p" Z2 ?
铺下去后第三天观察滋养层细胞
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报纸
发表于 2015-1-29 15:16 |只看该作者
回复 yuanyecat 的帖子
$ F9 F. W: c9 O5 H' g8 s) |
5 Z+ W% k8 E) m4 E! v1:真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧?我这个确实看不出来。
- m$ \4 ?- G7 P9 l& I2:二氧化碳浓度测试过,没问题。我准备再去测测温度和湿度。' v+ e& v' ]3 |( y5 ^0 E
3:这批细胞原来用都没有问题的,测了支原体,也是阴性的。
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地板
发表于 2015-1-29 16:39 |只看该作者
细胞老化,还有可能是细胞营养不良,检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。
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发表于 2015-1-29 16:55 |只看该作者
回复 zarecol 的帖子
$ @: J" q6 S6 x
5 W" r1 }) I2 N2 C9 s3 s# _0 |好的,多谢!

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发表于 2015-1-29 18:27 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子
) a. T1 Z( Z& `7 b4 A2 ^+ U8 R! ?6 x0 h
你饲养层细胞的制作过程是怎样的?如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存,若丝裂霉素处理力度过大,刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的,但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测,用的什么方法,可靠吗?
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发表于 2015-1-30 08:36 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子
; O# u: u6 x( J
2 f' e& h; l# d% F用的哪的血清,真心话,现在仿货太多,请留意。
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发表于 2015-1-30 09:07 |只看该作者
本帖最后由 gd541767393 于 2015-1-30 09:09 编辑
" R7 n% h$ B" f' v6 `. m9 X3 I, i, ~
细胞如果以前用没问题,现在出问题,,跟细胞本身没有关系,是不是这一批次培养基缺少某种成分,或者说血清有问题,感觉像是营养不足,或者可以测下内毒素,和病毒是否感染
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