实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。
) U6 @' j6 w+ ?$ u1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。
; ?/ w! _& T1 E) Q: @2 T; t3 n2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。6 ~, j( h7 ^% q' B* M6 A
3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。7 w1 {+ e2 J" |
现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，
/ J6 I; p' S6 e- V" D9 X% u- C1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？
) k/ I: I4 G9 t4 A- `8 C* e+ M2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。
8 X) f2 P0 g0 n* j! U) \% o3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

6 w/ f$ q& F9 o/ V% h1 _$ ^# ~, a1 c( R- x! f
回复 奇幻雪蓝 的帖子. x# n5 f' w2 S0 F5 a, V

4 S; A- a5 |- k9 B/ T* O2 o, P

2015-1-29 15:11 上传

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铺下去第一天的滋养层细胞

0 J' M0 m+ W& u$ W" U( m铺下去后第一天观察滋养层细胞/ z+ ~: f% t7 L7 N2 p6 f

5 V( S5 q2 c0 M5 L

2015-1-29 15:12 上传

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铺下去第三天的滋养层细胞

& ~. ]: |% n0 g* H2 P$ p" Z2 ?
铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

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$ F9 F. W: c9 O5 H' g8 s) |
5 Z+ W% k8 E) m4 E! v1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。
- m$ \4 ?- G7 P9 l& I2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。' v+ e& v' ]3 |( y5 ^0 E
3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

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$ @: J" q6 S6 x
5 W" r1 }) I2 N2 C9 s3 s# _0 |好的，多谢！

宋红卫song

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) a. T1 Z( Z& `7 b4 A2 ^+ U8 R! ?6 x0 h
你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

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; O# u: u6 x( J
2 f' e& h; l# d% F用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

" R7 n% h$ B" f' v6 `. m9 X3 I, i, ~
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染