实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。) K( p! A. h+ k. Q4 `9 z
1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。. B3 n# g7 b! V$ B5 M
2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。
' J$ |' T5 X2 l5 e1 v& e3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。! ~- ]( d) w3 X; N$ \0 V5 j( Q" }
现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，  l; y& B; S. [8 J
1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？! @" S/ g9 B" Z9 w1 ?8 e" y5 B
2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。
8 ~& y/ O" D) v: u  q0 t3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

" e8 c8 q+ j. K: C' ]! I
4 Y; W5 M6 ^( F. |6 H: h. }8 |6 L回复 奇幻雪蓝 的帖子: t, C9 ]' I7 Z, o, j( ^. e. h

; Z9 o2 S( w- r/ M  f

2015-1-29 15:11 上传

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铺下去第一天的滋养层细胞

. S& r. N, n. |. t, }, F铺下去后第一天观察滋养层细胞+ @9 L% G* ]$ p8 G7 B
! w7 I& b, j1 I3 x  k1 V+ Q

2015-1-29 15:12 上传

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铺下去第三天的滋养层细胞

; A! `9 q+ y2 s0 _) t  i6 B5 W1 c
铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

回复 yuanyecat 的帖子
* U8 i4 L5 f3 v1 |4 F& }. e% R1 V8 w% j8 [
1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。
, ]8 ?7 l0 w) C) c2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。# G+ E' u. y5 F6 |
3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

回复 zarecol 的帖子* b9 K5 Q+ M  C1 L8 [& v  n
/ e9 S8 I4 x. H+ J
好的，多谢！

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子4 h+ `. U) h8 }8 u) W( g

( R! }$ F" J" U/ d  V* Q0 U你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

回复 zkfootball 的帖子+ V8 q# m+ ~3 L: i, y( Y

, h1 |9 G  x, T& N用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

, o  V4 J3 G/ J7 x8 N* A% S$ k' R+ k2 c% _2 M0 F& A1 @
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染