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[请教] 实验室细胞增殖慢,死的厉害     [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2015-1-29 10:22 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
大家好,我们实验室的细胞感觉增值不起来。) K( p! A. h+ k. Q4 `9 z
1:293T原来2-3天传一次代,但是现在4天都没有达到可以传代的密度。. B3 n# g7 b! V$ B5 M
2:养滋养层细胞(用于支持人的胚胎干细胞),如果是未用丝裂霉素处理过的,第一天贴下去还挺好,但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过,在hESC培液里长得很好,在原先滋养层细胞培养基里(DMEM+10%FBS)就会死的厉害。
' J$ |' T5 X2 l5 e1 v& e3:已经检测过支原体,发现没有污染。也换过DMEM,FBS,也没有改善。! ~- ]( d) w3 X; N$ \0 V5 j( Q" }
现在都不敢养细胞了,请大家提一些可能的原因。谢谢!
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沙发
发表于 2015-1-29 11:45 |只看该作者
死的厉害是什么样子的现象?怎么死的?死的时候细胞是什么样子的?有没有变长或变大/变黑?培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不?
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金话筒 优秀会员

藤椅
发表于 2015-1-29 14:29 |只看该作者
细胞死亡的原因,  l; y& B; S. [8 J
1.真菌或者细菌污染。你除了支原体,细菌和真菌你检查了吗?! @" S/ g9 B" Z9 w1 ?8 e" y5 B
2,培养箱的问题,你检查了你们实验室的培养箱,温度,湿度,二氧化碳浓度都正常吗?不要看指示表,你这种情况是不是培养箱感应器有问题,要自己亲自测量一下。
8 ~& y/ O" D) v: u  q0 t3,滋养层细胞有问题,你检查了滋养细胞了吗?比如污染等
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板凳
发表于 2015-1-29 15:13 |只看该作者
干细胞之家微信公众号
本帖最后由 zkfootball 于 2015-1-29 15:14 编辑
" e8 c8 q+ j. K: C' ]! I
4 Y; W5 M6 ^( F. |6 H: h. }8 |6 L回复 奇幻雪蓝 的帖子: t, C9 ]' I7 Z, o, j( ^. e. h

; Z9 o2 S( w- r/ M  f 铺下去第一天的滋养层细胞
. S& r. N, n. |. t, }, F铺下去后第一天观察滋养层细胞+ @9 L% G* ]$ p8 G7 B
! w7 I& b, j1 I3 x  k1 V+ Q
铺下去第三天的滋养层细胞 ; A! `9 q+ y2 s0 _) t  i6 B5 W1 c
铺下去后第三天观察滋养层细胞
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报纸
发表于 2015-1-29 15:16 |只看该作者
回复 yuanyecat 的帖子
* U8 i4 L5 f3 v1 |4 F& }. e% R1 V8 w% j8 [
1:真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧?我这个确实看不出来。
, ]8 ?7 l0 w) C) c2:二氧化碳浓度测试过,没问题。我准备再去测测温度和湿度。# G+ E' u. y5 F6 |
3:这批细胞原来用都没有问题的,测了支原体,也是阴性的。
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地板
发表于 2015-1-29 16:39 |只看该作者
细胞老化,还有可能是细胞营养不良,检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。
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发表于 2015-1-29 16:55 |只看该作者
回复 zarecol 的帖子* b9 K5 Q+ M  C1 L8 [& v  n
/ e9 S8 I4 x. H+ J
好的,多谢!

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发表于 2015-1-29 18:27 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子4 h+ `. U) h8 }8 u) W( g

( R! }$ F" J" U/ d  V* Q0 U你饲养层细胞的制作过程是怎样的?如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存,若丝裂霉素处理力度过大,刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的,但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测,用的什么方法,可靠吗?
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金话筒 优秀会员 热心会员 小小研究员 积极份子 帅哥研究员

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发表于 2015-1-30 08:36 |只看该作者
回复 zkfootball 的帖子+ V8 q# m+ ~3 L: i, y( Y

, h1 |9 G  x, T& N用的哪的血清,真心话,现在仿货太多,请留意。
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发表于 2015-1-30 09:07 |只看该作者
本帖最后由 gd541767393 于 2015-1-30 09:09 编辑
, o  V4 J3 G/ J7 x8 N* A% S$ k' R+ k2 c% _2 M0 F& A1 @
细胞如果以前用没问题,现在出问题,,跟细胞本身没有关系,是不是这一批次培养基缺少某种成分,或者说血清有问题,感觉像是营养不足,或者可以测下内毒素,和病毒是否感染
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