实验室细胞增殖慢，死的厉害

zkfootball

大家好，我们实验室的细胞感觉增值不起来。
* C' D: w( W  P. i1：293T原来2-3天传一次代，但是现在4天都没有达到可以传代的密度。  m0 r+ s) C0 o6 L  G
2：养滋养层细胞（用于支持人的胚胎干细胞），如果是未用丝裂霉素处理过的，第一天贴下去还挺好，但是第2-3天就开始死的厉害。如果丝裂霉素处理过，在hESC培液里长得很好，在原先滋养层细胞培养基里（DMEM+10%FBS）就会死的厉害。
6 E0 P0 G. \2 \7 H* V3：已经检测过支原体，发现没有污染。也换过DMEM,FBS，也没有改善。
0 c; ]+ `5 a% `现在都不敢养细胞了，请大家提一些可能的原因。谢谢！

奇幻雪蓝

死的厉害是什么样子的现象？怎么死的？死的时候细胞是什么样子的？有没有变长或变大/变黑？培养基的颜色有没有变化或者PH值变化大不？

yuanyecat

细胞死亡的原因，' }7 j1 B/ y% S% E" e+ O3 C3 A5 ]
1.真菌或者细菌污染。你除了支原体，细菌和真菌你检查了吗？
( ?' ^4 M$ b9 W9 V  h8 B9 b2，培养箱的问题，你检查了你们实验室的培养箱，温度，湿度，二氧化碳浓度都正常吗？不要看指示表，你这种情况是不是培养箱感应器有问题，要自己亲自测量一下。2 V- b) g% p8 M7 ]! f
3，滋养层细胞有问题，你检查了滋养细胞了吗？比如污染等

zkfootball

, }  [( g- F8 q4 b, z
7 d& \! V. H# S
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: M2 h7 l$ _% A0 T" }$ n; \, S) Z2 j  o! O) A5 _& j

2015-1-29 15:11 上传

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铺下去第一天的滋养层细胞

- y2 Y# J, X# E6 {% ~9 z! [铺下去后第一天观察滋养层细胞) |' d2 U& _' X
+ z) @2 R2 F" O  I1 o

2015-1-29 15:12 上传

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铺下去第三天的滋养层细胞

, y0 s0 O2 G! ?3 T( ~8 m/ N2 q
铺下去后第三天观察滋养层细胞

zkfootball

回复 yuanyecat 的帖子
: b- T! y4 b/ l' E! J  w- |# i  Q5 G, o  g/ }0 T
1：真菌或者细菌感染应该可以肉眼看出来吧？我这个确实看不出来。
5 k0 l# q) I" i7 a7 _2 A2：二氧化碳浓度测试过，没问题。我准备再去测测温度和湿度。# {  I" y1 y  d6 |3 b
3：这批细胞原来用都没有问题的，测了支原体，也是阴性的。

zarecol

细胞老化,还有可能是细胞营养不良，检查你的细胞来源和培养液中营养成分是不是有质量不过关的。

zkfootball

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) n3 }% P2 n- Q, b5 ^) G
' E. B7 A) x. K: D2 }" ^# c# N好的，多谢！

宋红卫song

回复 zkfootball 的帖子" [% @' n% @6 g: v- j
* o  T0 B+ ?3 B4 g) m. j
你饲养层细胞的制作过程是怎样的？如果是之前丝裂霉素处理后立即冻存，若丝裂霉素处理力度过大，刚复苏时饲养层细胞还是可以长得很好的，但过一两天就会死。可能是丝裂霉素处理力度过大吧。你说进行了支原体检测，用的什么方法，可靠吗？

dahui

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& ^: q6 |) n2 k# z/ L+ X9 [0 b6 d+ o( @; T4 y0 h2 C' M& G
用的哪的血清，真心话，现在仿货太多，请留意。

gd541767393

; c& v5 @' m" n8 Y" C7 E
: R, T, z; O0 R8 b3 A9 m) O( p
细胞如果以前用没问题，现在出问题，，跟细胞本身没有关系，是不是这一批次培养基缺少某种成分，或者说血清有问题，感觉像是营养不足，或者可以测下内毒素，和病毒是否感染