小鼠iPS诱导靶细胞形态变化图，大家帮忙分析下是否正常

宋红卫song

病毒侵染2d后：
$ i/ w/ J: r- _2 W
+ m1 ?7 K! p4 t相应的pMX-GFP对照：4 c* d- A$ A3 J& v: R& E$ x$ d4 C$ a! C

1 q8 h! Q3 Y5 `  S. M病毒侵染3d后：" z/ b9 ?$ Y' ?  @$ v
+ ?& p& I4 `6 h/ H  X: A
到病毒侵染4d时，将靶细胞接种到饲养层上。
" L3 |) V( Y, l! d第9天细胞形态：
9 v* t$ n: n5 c1 j, s3 j. m1 Z/ E" k) M* b

; w/ A$ a( Z; E" ^, k1 e正常来讲，四因子诱导第9天，应该出现mES样克隆。然而我发现克隆并非长得像典型的ES样，而是呈现不规则形、不够致密、细胞核清晰可见、边缘不清晰等。
4 u- t$ v9 ?- W# K; N我用的是Oct4-EGFP鼠，第九天没看到绿色荧光。
5 T/ M, Y8 W8 k: @分析后，发现可能有以下原因：
$ e1 U: [3 g- B: s- W; h1、病毒量还不够，细胞诱导不充分，发生不完全重编程，类似克隆形状只是因为这些细胞分裂旺盛；
' j& h5 [( D. i  t4 Y2、LIF失效。我用的LIF在4°C存放近一年，而有些克隆在边缘才出现核质比高、折射光强的细胞，可能因为LIF失效导致；  |' G" Z# O. X6 B" u2 M6 @1 J# K5 p7 Y
3、本身小鼠四因子诱导在第九天时并不能观察到典型的ES样克隆，我观察的是正常现象，只需继续培养即可。# E* O3 R' W9 X4 M0 d- y
4、其他原因。# [' @! m( v& |: R: j
希望有相关经验的科研工作者为我解答一二，我观察的克隆形态是否正常，如果不正常，其可能的原因是什么？
) @- k5 H3 n$ R# U9 m/ L
! z, j' E  u' G! R: n补充内容 (2015-2-6 16:45):
+ k1 ?" ?5 K( @5 U发帖时有些小错误：最后三张图中，前两张是pMX-GFP对照。最后一张是OSKM+miR-200c+miR-302诱导iPS

wang331212

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) c- L4 z) y0 x' g: J" C. ~
& u; t! J! O7 Q2 Q. X) j厉害 想你学习

linqun

我和您一样的问题，能请教一下您怎么解决的吗？

scottist

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1 u+ v0 G# P, _6 |9 `% N) ^% q
5 V3 a% B1 E9 E- T; V你好，我看着不太像，15天的克隆已经很大了，克隆中的细胞排列紧密。你这幅图中好像是一个单独的细胞，圆形的东东应该是脂肪滴。

张月儿

9天以后可以再等一等，我们一般在转染后第11天才会挑克隆转移至feeder cell上。

细胞海洋

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  |$ F: O5 I+ f4 ^  ?
8 h* `3 w! Q3 G建议你发新帖提问

快乐小泡

回复 宋红卫song 的帖子) @5 l+ l8 Y7 Z/ b/ P5 K
& B! N  f8 q7 A1 _2 u* y* ^
请问克隆刚刚出现的时候是什么样子的呢？能否给一张早期克隆的图片参考一下呢？

快乐小泡

回复 scottist 的帖子& {* f9 g4 ?! n- Z, h  U/ h
" \% Z# J2 |! w; \! ~0 q- M: P
这是诱导第15天时的细胞簇，请问这是正常的吗？

快乐小泡

回复 scottist 的帖子
6 @. e$ ?3 H# O( x) u
8 m* q6 }$ |* q3 y$ h请问，我诱导第15天看到小的细胞簇，很亮，立体感很明显，不知道是不是正常呢？

快乐小泡

请问，我诱导第15天看到小的细胞簇，很亮，立体感很明显，不知道是不是正常呢？