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病毒侵染2d后:
+ f; V+ F% {- b0 |6 B
& j7 ^; h! J5 R* J7 k相应的pMX-GFP对照:
6 x+ b. J% a( O( K$ i% p2 ^. B9 z" U
T( [! [; D% _6 s) P" b" D/ D! k: J病毒侵染3d后:
- h& \- Q6 |+ G, c6 b+ M5 T) n q; S- K7 t2 l
到病毒侵染4d时,将靶细胞接种到饲养层上。1 g# X# [+ @& k6 c7 L
第9天细胞形态:
; w8 O, W+ I% M' W$ N3 t; ?% X0 r6 X/ p- _% `
' O8 @" Q& H1 ~9 q! |# w正常来讲,四因子诱导第9天,应该出现mES样克隆。然而我发现克隆并非长得像典型的ES样,而是呈现不规则形、不够致密、细胞核清晰可见、边缘不清晰等。) e8 t% I& E# E! T- S; l4 T
我用的是Oct4-EGFP鼠,第九天没看到绿色荧光。
+ r! I* @8 c/ @9 Y. |2 [+ A分析后,发现可能有以下原因:
9 N1 {9 C. R" F" B1、病毒量还不够,细胞诱导不充分,发生不完全重编程,类似克隆形状只是因为这些细胞分裂旺盛;/ X, W. t- [+ W3 r+ s7 A' A
2、LIF失效。我用的LIF在4°C存放近一年,而有些克隆在边缘才出现核质比高、折射光强的细胞,可能因为LIF失效导致;
- `* X- m* M3 ]3、本身小鼠四因子诱导在第九天时并不能观察到典型的ES样克隆,我观察的是正常现象,只需继续培养即可。7 X, j3 Z2 }# y5 T) B1 M5 ]
4、其他原因。; h) O" u, Y2 `, k
希望有相关经验的科研工作者为我解答一二,我观察的克隆形态是否正常,如果不正常,其可能的原因是什么?
5 y8 b: @* Y/ S W. y9 D s: n
8 S) }5 P9 ^5 e0 v1 d F8 [补充内容 (2015-2-6 16:45):
" O: {) q$ \. p0 g0 r3 k发帖时有些小错误:最后三张图中,前两张是pMX-GFP对照。最后一张是OSKM+miR-200c+miR-302诱导iPS |
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