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病毒侵染2d后:
2 e f5 y, K& c0 I- U2 u# W: g
相应的pMX-GFP对照:
) h# l9 M; H# Y& l4 \" {5 g1 ~1 @
) d% m) D8 N$ \' d: c病毒侵染3d后:
9 I5 k3 E2 y# k4 q I; [; N; H E+ U2 F% ` S4 x* u: z1 a
到病毒侵染4d时,将靶细胞接种到饲养层上。6 W, G6 p i4 }+ j* ^3 Z0 a& ^
第9天细胞形态:
+ q6 ]; n; _" }$ u: @# V" i; m( b- ~) g$ t+ ~/ h r# \( O
# ?( n1 k* d. l正常来讲,四因子诱导第9天,应该出现mES样克隆。然而我发现克隆并非长得像典型的ES样,而是呈现不规则形、不够致密、细胞核清晰可见、边缘不清晰等。. H. ^7 c& M- r. ?
我用的是Oct4-EGFP鼠,第九天没看到绿色荧光。
$ w O, c* g" g2 P, ^分析后,发现可能有以下原因:
5 g# |, B( a8 e' W) g5 t1、病毒量还不够,细胞诱导不充分,发生不完全重编程,类似克隆形状只是因为这些细胞分裂旺盛;
; L5 `4 l7 O! {' n& T0 q" \7 ?. w2、LIF失效。我用的LIF在4°C存放近一年,而有些克隆在边缘才出现核质比高、折射光强的细胞,可能因为LIF失效导致;8 b. W, Y+ b6 h8 i; i: ?- j
3、本身小鼠四因子诱导在第九天时并不能观察到典型的ES样克隆,我观察的是正常现象,只需继续培养即可。$ u& s# V& D4 i3 `$ t& ^1 \, w
4、其他原因。5 n# B6 k) p/ @2 L( j; D& P7 n
希望有相关经验的科研工作者为我解答一二,我观察的克隆形态是否正常,如果不正常,其可能的原因是什么?
# Z9 g9 e, N( t; i6 N; F0 D: h0 l, m% z/ ^* m+ K; a6 l4 U
补充内容 (2015-2-6 16:45):: i# A0 w3 Q3 F" Q" T. U4 W6 Z
发帖时有些小错误:最后三张图中,前两张是pMX-GFP对照。最后一张是OSKM+miR-200c+miR-302诱导iPS |
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