继续拜托流式达人和免疫细胞资深老师帮忙看图

baby00000003

这是CIK细胞培养第13天的流式表型检测，3表示CD3，56表示CD56，iso表示同型对照，SAM表示样本" S+ Q( J& b8 Y4 s( Z% y" p5 O6 D. X( V
想请教各位老师，
5 p+ N5 C7 H8 J* A1，培养到这个样子就可以进行和加载TAA的DC的共培养了吧？3 v# T2 h/ z  |& Q. ^
2，从流式图来看，可不可以理解为“同一群细胞中有一部分CD56明显阳性，其他的CD56阳性弱或者不表达”？7 G* X3 m0 y& \  S
3，如果继续培养下去，CD56的阳性率还会继续升高么？
9 ]: K; W, y* P5 e! y5 e8 |' d4，更高的CD56阳性率是不是等于更强的细胞毒性呢？
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lzlmiranda

你这个图用的是单通道，测CIK的流式表型至少是要双染色看CD3和CD56的双阳性，这批CIK，CD3达到99%正常，CD56单阳性才22.9%，双阳性估计会低于20%，算低的了，不过也和病人外周血质量有关系。
- z7 v# H9 i" ^  x" @至于和DC的混养，13天的CIK都已经有点老了，如果你的DC和CIK是同时制备，那么DC也培养了13天？这种DC的培养方案，不是很常见，你有特别的用意么？

baby00000003

3 R$ `& m9 L0 E6 ]0 A( d+ @  _; E2 |$ L: q+ {) _5 N8 t( a
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) Z- u: z" `; s. N: G! E/ U- A: a8 X+ T. S
先说双通道，因为前辈遗留了一堆抗体，都是PE耦联的，不舍得浪费掉，就先凑合用了，这是我第一次做DC-CIK，先不浪费那些好试剂了
# l8 s3 t5 t$ A. r" k一直在等CD56+比例上去，DC也已经养了13天了，目视外观还算正常，现在没有CD83，准备明天做个CD86，HLA-DR看看  e3 M! i# q3 Q, v  v% k
嗯....就纯数学计算来看，细胞总数一样的时候，CD3=99%，CD56=22%的话，CD3CD56双阳性最低也要21%，这么理解为什么不对呢？# m9 m+ N6 c2 @& V4 b( @' }- C

dollar007

双阳率20%左右，并不算低，因人而异，尤其是病人的外周血，更糟糕的是病患老人的外周血，放化疗后，这类人血象都很差。CIK培养至13天，时间不算晚，DC培养久了。

yuanyecat

这个阳性率不算弱了，如果你想要图好看些，可以用双通道的CD3，CD56双抗体筛选，看起来会不错

baby00000003

回复 dollar007 的帖子5 q0 C& k/ C! y/ j
) b. j: Q4 ?$ q- p
如果“病人血象不好”的话，采血前给他输点IL-2什么的，有用么？
0 J; v/ ~3 H* e7 y" W% P! i' t或者即使是“平常血象”，输点IL-2能不能更有利于培养CIK呢？

dollar007

回复 baby00000003 的帖子3 z  k8 Q) C0 W% H4 E( u' J

* s  v# N7 E/ X6 l4 u& Y癌症病人如果要做DC-CIK，给医生建议：对病人用增白剂（增加白细胞比例的一种药）。能不能用白介2，这个医生说了算，我们只是技术员，不是医生。

lzlmiranda

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3 e# r2 H9 c+ M
, j, B, D( W+ Z2 Z13天的CIK算正常，养了13天的DC实在是很少见，你确定那还是DC细胞么？如果诱导PBMC不成功的话一般会出现梭形的贴壁细胞，那些大多数都是巨噬细胞了。

lzlmiranda

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9 L( {! z  d& w7 w6 T
1 S& ^8 y: F4 O7 [9 y打升白针是针对白细胞极度底下的患者，并不是所有人都适合。升白针有两种一种叫G-CSF，粒细胞集落刺激因子，一种叫GM-CSF，巨噬细胞粒细胞集落刺激因子，这两种从名字上看就知道主要是升粒细胞的，而不是淋巴细胞，用升白针打起来的白细胞属于幼质白细胞，很多功能都不完善，用来培养真的够呛。很多病人在化疗期间长时间使用升白针还有可能导致极大地副作用，有可能白细胞再也升不起来，我还见过打升白针打成再生障碍性贫血。0 T) M% ]% X# ]6 ^. X% g
对于我们做细胞治疗的来说，升白针实在是躲得越远越好，打了升白针至少要恢复一段时间才能采血。

lzlmiranda

这是我上个月抽检的一个，算做的比较好的，25%也算基本线了吧。我曾经被上海的一家公司鄙视过，他们在实验室的数据可以达到50%以上。