诱导骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化

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诱导分化
% }8 S1 M3 x5 @" N: u1 w细胞以每毫升 5 ×104   ,接种于培养皿中 ,细胞达到 80 %汇合后更换成脂诱导培养液(L－DMEM 培养液 ,10 % FBS , 地塞米松 10-6mol/L , 胰岛素10  mg/L , 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX 0.5 mmol/L ,吲哚美辛 0.2mmol/L),对照组继续加常规培养液 ,每 3 天换液一次。在诱导 6 、9 、12 、15 、18  d 时各取各组细胞进行油红 O 染色 ,光镜下观察并摄影。
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油红O配方
5 @5 w9 s9 L/ T* ~油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.- u; E/ H2 V2 P; T$ v: \/ v/ u
油红O染色/ R% B7 D/ ^" U, e
①固定于10%中性甲醛溶液内1～2d.
: g% `) y( q7 c' u5 a" B②蒸馏水洗冰冻切片1 0～20μm入蒸馏水.
. o: ~7 V; D. ?5 B* O: X1 O③用70～80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗., @! m9 V- \$ T' L3 r' j( K
④入油红O 染色15～25min.
0 l* @+ ?3 Z" J" k' P. q⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.
+ |8 `+ f: w$ b0 W6 l+ r: C⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.

张俊克

多谢多谢

heshq106

细胞固定的时间太长了！