诱导骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化

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诱导分化
5 O9 O4 }" r1 [8 Z6 l) B5 I细胞以每毫升 5 ×104   ,接种于培养皿中 ,细胞达到 80 %汇合后更换成脂诱导培养液(L－DMEM 培养液 ,10 % FBS , 地塞米松 10-6mol/L , 胰岛素10  mg/L , 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX 0.5 mmol/L ,吲哚美辛 0.2mmol/L),对照组继续加常规培养液 ,每 3 天换液一次。在诱导 6 、9 、12 、15 、18  d 时各取各组细胞进行油红 O 染色 ,光镜下观察并摄影。0 w" k' E/ ^+ W  j
5 K3 w1 ]) L  S( Q0 t$ Z( _: H
油红O配方
$ r9 i& |; ]" N8 Y油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.! `- b6 {* Q' P% `3 j2 m
油红O染色" u' u6 e6 \3 P+ D. I$ J& O
①固定于10%中性甲醛溶液内1～2d.
- D0 \9 u  Z' e$ H( I) l: ^7 |②蒸馏水洗冰冻切片1 0～20μm入蒸馏水.
5 T: a8 X- q) J③用70～80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗.
- k. e- C/ q4 l  l: p! V1 q④入油红O 染色15～25min.3 j- n8 a" H6 f; e8 r' D
⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.
9 L! T! p; i  |8 Q⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.

张俊克

多谢多谢

heshq106

细胞固定的时间太长了！