诱导骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化

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诱导分化
; }; l2 Q" v9 h7 M6 [$ V. E细胞以每毫升 5 ×104   ,接种于培养皿中 ,细胞达到 80 %汇合后更换成脂诱导培养液(L－DMEM 培养液 ,10 % FBS , 地塞米松 10-6mol/L , 胰岛素10  mg/L , 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX 0.5 mmol/L ,吲哚美辛 0.2mmol/L),对照组继续加常规培养液 ,每 3 天换液一次。在诱导 6 、9 、12 、15 、18  d 时各取各组细胞进行油红 O 染色 ,光镜下观察并摄影。# u$ `3 r8 X5 C0 c' P$ t
2 x- Y# W7 [: J) ~* P4 Z( O
油红O配方* S) v! ^. m1 }5 }  O) Q
油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.
! _' R! Q4 n* L. C" r( j油红O染色
+ j* C8 m8 m7 ^4 [①固定于10%中性甲醛溶液内1～2d.
9 l8 H( F  z* _& L②蒸馏水洗冰冻切片1 0～20μm入蒸馏水.
+ @2 m+ g# I3 ?5 {1 C③用70～80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗.9 D4 z. d# L7 H: `
④入油红O 染色15～25min.- ]. ~- |: Z" N- a* [4 m
⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.
/ N9 t) n* K/ F9 t5 f⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.

张俊克

多谢多谢

heshq106

细胞固定的时间太长了！