诱导骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化

richy

诱导分化. g: f9 r1 U+ W
细胞以每毫升 5 ×104   ,接种于培养皿中 ,细胞达到 80 %汇合后更换成脂诱导培养液(L－DMEM 培养液 ,10 % FBS , 地塞米松 10-6mol/L , 胰岛素10  mg/L , 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX 0.5 mmol/L ,吲哚美辛 0.2mmol/L),对照组继续加常规培养液 ,每 3 天换液一次。在诱导 6 、9 、12 、15 、18  d 时各取各组细胞进行油红 O 染色 ,光镜下观察并摄影。
. x* r9 j( G$ T* v& O' d1 F: y: w7 q8 F. c8 b3 j1 L1 h4 T
油红O配方
1 _  [; K) e9 Z0 v* y油红O1g,异丙醇100ml或70%酒精100 ml,将油红O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱中60℃30min,用前过滤,临用时取油红O10ml,蒸馏水10ml,两者混合后立即变成鲜红色液体,静止30mi n后过滤使用.
' z( h: H1 y2 w6 z1 \% ]- E油红O染色8 B. t9 i$ W5 U" `( e6 O
①固定于10%中性甲醛溶液内1～2d.8 h: v2 u6 ?4 l# e  G' i* r
②蒸馏水洗冰冻切片1 0～20μm入蒸馏水.1 z+ G5 Y, S6 Y. Z% s
③用70～80%异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗.
( C/ l3 t2 O/ C5 K$ o6 g- Z* |' j④入油红O 染色15～25min.
4 x7 w1 r; q" w⑤入异丙醇或酒精或蒸馏水洗.
# ^3 a) I$ D+ @, A! n4 {; F+ k⑥用苏木素淡染细胞核,充分水洗,用甘油明胶或用PVP封固.

张俊克

多谢多谢

heshq106

细胞固定的时间太长了！