这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，4 y6 p; `+ ?( J3 t, _! G0 b. @

2 y7 m: h) F& y3 J& @/ N) N. ]- W
- [3 z. J* c4 H( Y这是培养至D4的外周血CIK
( O  ?! R  n/ p; W4 O6 F  J不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）
9 {$ L9 O& m, d2 S8 n# M3 H3 E
6 l  L: x& L% q, ND0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了4 z) N7 i. a* m; _) y  h6 x

. V5 q* _/ r( F$ k2 o% m2 nCD56单阳性的会是什么细胞呢？
. b* G; u! J8 j9 B( U0 i2 p' LNK？
% R  c8 Q8 k$ O( N" H7 _但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？
( A; Y0 k/ W. C! y5 f5 S+ k6 W! g) P: ?8 v8 t$ p) t
画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......7 v5 Z" ?& C- }
& ?" F! b: V* R
求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

回复 baby00000003 的帖子. a, k3 B9 i; k* x0 n* f

7 y; c$ W6 i: q# Q6 F5 b, q嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

回复 cjsbaicai 的帖子, W" U% N& t" Y, P( W" a- T
/ a/ P7 r! m1 b9 P' A9 e5 S
那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......2 e; ~" @( k0 B
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......
9 [3 x" J8 A/ Z' m7 W( _7 ~如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。6 ^4 X, z8 ~# @0 {" u: {
CIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。) u) X$ p' w! \4 D3 x
另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

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左边那个图是isotype，; K7 U/ R( v" V5 z; @& l. f  K' I
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......
# O2 D, o( s% gD0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了% P3 D' Q4 R* f! S2 @7 q. f9 [  E0 j
我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚