这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，/ U9 B" H' {' }# [+ E' U* d" k
. Y3 _" V) I$ c) u

. V/ e: I. w1 m# t6 W% z/ ?: X% u/ p这是培养至D4的外周血CIK' j/ f5 c) F9 U! H
不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）
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7 r, l- @* u" j! v5 Y. _( u: sD0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了" c* H1 ^7 v% e0 ~7 O$ g( n
9 c/ u5 |5 c: q- h5 l; J5 W
CD56单阳性的会是什么细胞呢？! P1 U& W/ a- X
NK？/ n4 x/ @2 \9 O; }! j3 s3 H( e5 M& y
但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？
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" _! j- D1 G6 h) ?# F: [, E* Y% z画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......
# v/ K6 E4 p! ^* y9 N8 }$ u% O+ q5 O6 j- A6 A+ n* K; h7 q: b8 T
求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

回复 baby00000003 的帖子- p. L4 K! Q& r' T) H
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嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

回复 cjsbaicai 的帖子: T3 |  M# f7 F6 k7 N: ^
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那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......5 ^# v) K. f) m' ?5 m1 t
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......4 c5 a+ ]7 F) w0 l- e2 D/ u2 P7 S
如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。
9 J. A' Y; z6 ?2 \# V7 |& QCIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。0 H% \2 D7 Q/ d' b
另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

回复 暖羊羊 的帖子
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左边那个图是isotype，: k2 K" j* C4 }% |) ^6 {6 [/ [
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......5 R5 _3 T# i3 O" n" r5 u& Z( P2 W
D0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了
( q( ~. b2 c  H7 v3 V我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚