请各位大神帮忙看一下我的WesternBlot实验结果是什么原因

木三阿凉

蛋白分子量较小，在 25-20kDa 之间，电泳条件为： 第一阶段 恒压80V 30min，第二阶段 恒压100V 90min 。转膜条件为： 恒流0.2A 120min。7%脱脂奶粉封闭3h，一抗过夜，TBST洗膜4次，每次10分钟。二抗孵育2h，TBST洗膜4次，每次10min。

2015-4-15 15:54 上传

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木三阿凉

下面这张是内参/Users/pro101/Documents/实验结果/WB实验结果/2015-04-15/44E58794-E32A-431B-880E-1070B03A58C2.png

木三阿凉

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蛋白表达量低，所以上样量为80ug，一抗是小鼠的单克隆抗体

luckyliu

不知道是拍摄出来效果不好，还是本来就这么暗，有两点建议：
- C1 P9 R: f$ \4 ~1，第三泳道条带变形，可能是胶配的不好，没有混匀；
# ?1 }) a3 ~' V2，条带不太清晰背景较多时，建议一抗二抗都用10%脱脂牛奶+TBST孵育

木三阿凉

回复 luckyliu 的帖子9 p1 i  p) b* _( B$ ]7 ?/ o1 j! a

: R1 |$ V6 S* K9 k嗯！好的，谢谢你~

liuyasi2008

建议降低一抗浓度和减少曝光时间，杂带太多了。上样太高可以延长跑胶时间降低电流强度，跑的胶会好看一点。9 |# i4 f6 s9 J7 U+ F! q

木三阿凉

回复 liuyasi2008 的帖子5 c* D1 Y1 k0 F; i- E
5 g( s, D' k% X  q  l) O( }
嗯，好的！ 谢谢你~~

daviddow

可能有2个原因考虑：1一抗的原因；2是TBST没有洗涤好

moluxingke

在 白光下居然都能显出条带，这种情况还真少见呢，看来你蛋白上样量或是抗体浓度都需要调整，上面如果有你的目的条带的话，根据目的条带的强弱，调整蛋白上样量吧，如果很强，那就把抗体再稀释一下，曝光时间减少一些，另外，你没有必要用那么大的膜去显影吧，将膜剪细一点，只保留你的目的条带的位置就行了，当然如果你还有其他位置很相近的条带就另当别论了。
# {$ @1 [% }  _PS，转膜过程再好好检查一下，是不是有哪些小细节没有注意好？